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    循环肿瘤细胞检测对肾癌预后评估的价值

    时间:2020-10-27 14:28:45 来源:达达文档网 本文已影响 达达文档网手机站

    李昊 陈从波 姚启盛 龚小芳

    [摘要]目的:分析肾癌循环肿瘤细胞(CTCs)对肾癌预后评估的价值。方法:使用免疫荧光法检测107例肾肿瘤患者外周血CTCs计数,比较不同TNM分期患者CTCs计数差异。对患者治疗结果进行随访,随访终点为患者出现死亡、复发、转移或随访时间达到12个月。并按照患者治疗结局,将肿瘤稳定(TS)、肿瘤反应(TR)者纳入TS/TR组,将肿瘤进展(TP)者和死亡者纳入TP组,对其治疗前CTCs计数进行对比,分析CTCs评估肾肿瘤患者预后的价值。结果:107例患者平均CTCs计数为(10.82+2.73)个,I期、II期患者CTCs计数低于II期患者,II期患者CTCs计数低于IV期患者,差异有统计学意义(P<0.05)。107例患者中,TS34例,TR9例,TP64例。TS/TR患者治疗前CTCs计数低于TP患者,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:随着肾癌TNM分期的上升,患者CTCs计数逐渐增加,且治疗前较高的CTCs计数意味着更差的治疗反应,故CTCs计数能够为患者预后评估及治疗策略的调整提供一定参考。

    [关键词]循环肿瘤细胞;肾肿瘤;预后;评估

    中图分类号:R737.11

    文献标识码:A

    文章编号:2095-5200(2019)02-037-04

    DOI:10.11876/mimt201902010

    肾癌约占成人恶性肿瘤的2%~3%,其发病率位居泌尿系肿瘤第二位,据报道,全球每年肾癌新发病例、死亡病例分别达到20万、10万,較高的复发转移率是造成患者死亡率居高不下的主要原因”。循环肿瘤细胞(circulatingtumourells,CTCs)是指由肿瘤原发或转移灶播散于血液当中的肿瘤细胞,一方面,CTCs可播散于远处形成微转移灶并引发肿瘤转移,另一方面,CTCs也是肿瘤原发灶与转移灶间信息传递的重要媒介。亦有研究对非小细胞肺癌患者CTCs进行检测,发现CTCs与肿瘤细胞耐药及患者生存预后密切相关间。此次研究就CTCs对肾癌预后评估的价值进行了分析,旨在为肾癌患者预后的评估提供新的思路,现将研究方法与结果予以总结报告。

    1对象与方法

    1.1研究对象

    此次研究已获取医院医学伦理委员会批准许可,将2014年2月至2017年12月期间于我院确诊的107例肾癌患者为纳人此次研究,患者均经影像学及病理学检查明确肾癌诊断,既往无相关治疗史,对此次研究知情同意且自愿参与,排除同时合并其他类型恶性肿瘤者。107例患者中,男73例,女34例,年龄24~76岁,平均(56.81土13.42)岁,病理分型:透明细胞癌92例,非透明细胞癌15例(乳头状细胞癌4例、嫌色细胞癌2例、囊性肾癌2例、混合细胞癌3例、未分化癌4例);TNM分期(2010年AJCC肾癌分期标准)4:I期61例,II期19例,期16例,IV期11例。

    1.2检测方法

    采用免疫磁珠法检测,抽取患者晨起空腹外周静脉血10mL,加入淋巴细胞分离液,以密度梯度离心法分离单个核细胞以。按照每10mL血标本加入300μL免疫磁珠比例,将单个核细胞与磁珠混匀,于4C环境下孵育30min,使用分离缓冲液将其制成1mL细胞悬液,备用。使用磁性分离柱处理标记的细胞悬液,使用缓冲液清洗柱体,而后移出磁性分离柱,使用稀释缓冲液洗脱柱内细胞。将收集的细胞液离心处理后加入1mL缓冲液,于光镜下进行细胞计数,以3个视野内平均值作为CTCs计数结果。

    1.3疗效判断

    患者均在我院接受治疗,随访时间6~12个月,随访终点为患者出现死亡、复发、转移或随访时间达到12个月。疗效判断通过治疗前、治疗后CT检查结果,取病灶最大横径、最大纵径乘积计算肿瘤大小,治疗后原发肿瘤缩小为肿瘤反应(tumorresponsible,TR),原发肿瘤无变化为肿瘤稳定(tumorstable,TS),原发肿瘤增大或出现复发、远处转移为肿瘤进展(tumorprogression,TP)死亡病例计人进展组。

    1.4分析方法

    比较不同TNM分期患者CTCs计数差异,并按照患者治疗结局,将肿瘤稳定(TS)、肿瘤反应(TR)患者纳入TS/TR组,将肿瘤进展(TP)患者纳入TP组,对其治疗前CTCs计数进行对比,分析CTCs评估肾肿瘤患者预后的价值。

    1.5统计学分析

    对本临床研究的所有数据采用SPSS22.0进行统计学分析,CTCs计数以(x±s)表示,并采用t检验或F检验,以P<0.05为差异有统计学意义。2结果

    2.1不同TNM分期患者CTCs计数结果

    107例患者平均CTCs计数为(10.82±2.73)个,不同分期的CTCs计数分布见图1和表1,I期、II期患者CTCs计数低于II期患者,II期患者CTCs计数低于IV期患者,差异有统计学意义(P<0.05)。

    2.2不同治疗结局患者CTCs计数结果

    107例患者中,TS34例,TR9例,TP64例。TS/TR患者治疗前CTCs计数低于TP患者,差异有统计学意义(P<0.05)。见表2。

    3讨论

    既往报道表明,近1/3的肾癌患者确诊时已存在转移灶,同时,约有40%的患者会在治疗后1年内发生复发、转移,其原因与肿瘤细胞的血行播散有关功。随着肿瘤细胞不断增殖,部分细胞相互附着的能力下降,自母体脱落后浸润并降解周围组织,进而进人血液或淋巴系统内,故肿瘤细胞可随血液循环到达多个组织、器官。

    CTCs即为进人血液循环的肿瘤细胞,有学者认为,CTCs多在短期内死亡,仅有少数具有高度活力、高度转移潜能的肿瘤细胞可在循环系统内存活,相互粘附、集成,形成微小血栓,并在某些因素作用下发展为转移灶[9。最新研究发现,进人循环系统并存活的CTCs比例高达80%以上,且CTCs可于远隔部位穿出血管壁[10,故外周血CTCs的检出意味着肿瘤转移发生风险上升,而对于CTCs的检测则有望了解肿瘤转移特征、评估患者预后质量。

    为验证上述假设,此次研究选取107例肾癌患者,采用纳米免疫磁珠结合免疫荧光法,就其外周血CTCs计数进行了检测,结果显示,患者平均CTCs计数高达(10.82+2.73)个,与此同时,随着患者TNM分期的升高,其CTCs计数呈上升趋势,说明CTCs在肾癌转移过程中扮演了重要角色。多数研究认为,CTCs拥有侵袭基底膜能力,且可侵人间质组织,随着肿瘤的不断增长,肿瘤内部组织缺氧状态逐渐加剧,而组织缺氧状态可诱发新血管与淋巴管生成,为CTCs进入血液循环创造了更为便利的条件川。与此同时,肿瘤的发生发展也伴随着上皮细胞一间质转化过程,这一过程使得上皮细胞极性丧失、与基底膜连接中断,进而造成细胞迁移、侵袭、抗凋亡、降解细胞外基质能力持续上升,而CTCs具有类上皮细胞特性,在上述病理改变的影响下,CTCs更易自瘤体脱离、侵人血管,并经历上皮细胞一间质转化过程,使肿瘤细胞对远处组织的侵袭能力大幅增强。除此之外,原发瘤的营养供应主要来源于血管内皮细胞,而CTCs在进人和离开血液循环的过程中均可与血管内皮细胞相互作用,且这一作用最常发生于血流速度缓慢的毛细f血管部位;血管内皮细胞受CTCs破坏后可释放大量蛋白酶并加剧基底膜降解,为肿瘤细胞的扩散提供了更为理想的条件[14。因此,CTCs不仅意味着肿瘤细胞较强的增殖、转移能力,还与较快的肿瘤血管生成速度有关,故CTCs计数亦有望指导肾癌预后的评估。

    本研究就不同治疗结局患者治疗前CTCs计数进行了对比,结果显示,治疗前较高的外周血CTCs计数与较差的预后有关,其原因考虑与治疗前实体癌细胞已出现大范围脱落、微转移有关[19]。此外,肾癌的播散转移方式主要包括三类,一是向外穿过肾脏被膜的直接扩散,二是淋巴转移,三是血行转移[16,而CTCs的存在与增多可同时增强上述三种转移途径,加剧肾癌转移风险。现阶段对肾癌的疗效评价主要参考影像学检查结果,但对于病灶已完整切除的肿瘤患者的后续治疗如放疗、化疗、靶向治疗等,影像学检查并不能为肿瘤的治疗反应做出可靠评价。有研究发现,CTCs计数与多种恶性肿瘤患者生存时间呈负相关[7,因而通过治疗期间CTCs计数监测有望为治疗反应评估与生存时间预测提供一定参考。此外,亦有学者指出,铂类药物能够结合癌细胞DNA,形成链内、链间连结,发挥干扰DNA复制、转录等作用[18),而这一作用能够从源头上抑制CTCs生成,故含铂化疗方案可能能够进一步改善肾癌患者预后质量。

    此外,基于CTCs计数监测结果,对于指导肾癌患者个体化治疗也有着积极意义。目前对于恶性肿瘤患者而言,其治疗药物与剂量多根据TNM分期并结合临床指南制定,但在实际临床实践中,不同患者对同一治疗方案的治疗反应、不良反应存在较大差别,而根據CTCs计数变化制定并调整治疗方案,有望实现肾癌的精确化、个体化治疗,从而使更多的患者获益。同时,当前关于肾癌发病机制的探索尚处于起步阶段,在今后的研究中,进一步明确CTCs与成纤维细胞、内皮细胞、免疫细胞、血小板等细胞在病灶转移过程中的相互作用,能够更深层次的了解肾癌发生发展机制,进而寻求更为精确的治疗靶点,丰富肾癌的靶向治疗策略。

    需要注意的是,虽然免疫磁珠等细胞富集方法检测CTCs的检出率及灵敏度值得肯定,但其高昂的检测成本限制了这一技术的广泛推广,进一步改进并探索更为简便、低成本的检测方法,将为肾癌预后评估提供更为全面、可靠的循证医学证据,值得重视。

    总体而言,肾癌患者外周血中普遍可检出CTCs,随着肾癌TNM分期的上升,其外周血CTCs计数逐渐升高,且CTCs计数较高者预后质量往往更差,在重视CTCs检测的基础上,针对患者CTCs计数设定个体化治疗方案并探索靶向治疗策略,有望提高肾癌患者预后质量和生存时间。

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