[人参总皂苷减轻高能冲击波所致肾损伤的形态学研究]体外冲击波碎石的弊端
时间：2019-01-26 04:51:52 来源：达达文档网 本文已影响 人 
摘 要：目的：探讨人参总皂苷对高能冲击波所致肾脏损伤的作用。方法：家兔28只，随机分为对照组和皂苷组，每组14只，高能冲击波致伤前15min分别静脉注射生理盐水和人参总皂苷，在致伤后24h随机选取每组12只以体视学方法测量肾脏出血组织体密度和被膜下出血表面积，并进行病理观察，每组余下2只进行电镜观察。结果：皂苷组肾脏出血组织体密度和被膜下出血表面积较对照组降低；病理观察示肾脏出现不同程度损伤。结论：人参总皂苷可减轻高能冲击波所致肾损伤。
关键词：人参总皂苷；体外冲击波碎石术；肾损伤；形态学
中图分类号：R285.5文献标识码：A
文章编号：1673-7717(2008)05-0998-02
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Morphological Study on Reducing Effect of Ginsenosides on High �Energy Shock Wave Induced Renal Damage
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FENG Yan�hong，LI Chen�guang，JIANG Hua�mao，ZHANG Chun�yang�
（The First Affiliated Hospital of Liaoning Medical University, Jinzhou 121001,Liaoning,China）�
Abstract：Objective:To study the effect of ginsenosides on high energy shock wave (HESW) induced renal damage. Methods:28 white rabbits were randomly divided into the ginsenosides group and the control group, 14 in each group, they were treated with intravenous injection of ginsenosides and saline respectively 15 minutes before extracorporeal shock wave lithotripsy(ESWL).The volume density of renal hemorrhagic tissue and hemorrhagic area under renal fascia 12 in each group were measured 24 hours after ESWL. The histological changes of kidneys in rabbits were observed 24 hours after ESWL and 2 in each group were observed by electron microscopy. Results: In the ginsenosides group, there was a significant decrease in The volume density of renal hemorrhagic tissue and hemorrhagic area under renal fascia compared with the control group after ESWL. We observed renal injury in differrent degree in rabbits 24 hours after ESWL. Conclusion: Ginsenosides have protective effects on shock wave induced renal injury in rabbits.
Keywords:Ginsenosides; extracorporeal shock wave lithotripsy; renal injury; morphology��
体外冲击波碎石术 (Extracorporeal shock wave lithotripsy，ESWL)是80年代初开始用于临床的一门技术,已被公认是治疗上尿路结石的有效手段。随着ESWL的广泛应用，高能冲击波（High energy shock wave，HESW）对肾脏的损伤引起了人们的重视[1]。冲击波所致肾损伤与物理损伤、缺血再灌注损伤和氧自由基损伤等有关。人参总皂苷具有抗自由基脂质过氧化损伤，抑制细胞凋亡，保护线粒体功能等作用。本研究建立了家兔HESW致伤模型，通过对肾脏的病理组织学观察，研究ESWL对肾脏损伤的机制，并通过对肾脏出血体密度、被膜下出血表面积的测定，探讨人参总皂苷对HESW所致肾损伤的保护作用。�
1材料和方法�
1.1主要试剂和仪器纯度95％以上的人参总皂苷（广东惠州东方植物保健科技有限公司）以生理盐水配置成浓度2.0mg/mL的溶液； WD-91型B超定位水囊式体外冲击波碎石机（广东威达公司）。�
1.2 实验动物和分组选用雄性日本大耳白家兔28只（辽宁医学院实验动物中心提供），月龄3～4月，体重（2.0±0.2）kg,随机分为皂苷组和对照组，每组14只。实验前一天，使用8%硫化钠脱去家兔背腹侧体毛。�
1.3 冲击波致伤实验以3%戊巴比妥钠1.0mL/kg，经耳缘静脉麻醉后，以自制固定架将家兔固定于碎石机上，B超介导定位，第二焦点（F�2）定位于左肾肾盂，频率70次/min，工作电压12kV，冲击次数2000次。皂苷组和对照组分别于致伤前15min以10mL/kg静脉注射人参总皂苷溶液和生理盐水。�
1.4 光镜标本制作观察和体视学测量术后24h，麻醉后将每组随机抽取的12只家兔固定于手术台上，剖腹，分离左肾动脉，插管。开始灌注后剪开左肾静脉，依次用0.9%生理盐水20mL冲洗，10%甲醛溶液20mL灌流固定，然后沿肾门切断肾蒂，将肾脏投入到10%甲醛溶液内固定24h。用排水法测出肾脏体积V�（总），用“刀片架”将肾脏横行切成薄片[2]，刀片间距2.48mm。按卡瓦列里原理测量薄片上极被膜下出血的长度L�（n）[3]，并用公式S�（n）=ΣL�（n）×2.48计算出肾脏被膜下出血表面积。肾脏切片常规方法脱水透明，上极向上定向石蜡包埋，连续切片，厚度10μm，HE染色，光镜下观察。并在40倍光镜下，应用目镜方格测试系统，点记数法，根据公式[3]V�v=∑ni=1Pxi∑ni=1Pci（Vv为包埋组织块的出血体密度，P�xi表示第i幅切片上的出血组织点数，P�Ci表示第i幅切片上的总的组织点数，n表示切片数）分别计算重出血区（大量红细胞浸润、肾组织结构完全消失）、轻出血区（散在红细胞浸润、肾组织结构尚可分辨或聚集大量红细胞管型）的出血体密度。�
1.5电镜标本制作及观察取余下4只家兔，伤后24h麻醉后将家兔固定于手术台上，剖腹，分离左肾动脉，插管。开始灌注后剪开肾静脉，PH7.4磷酸盐缓冲液冲洗1min,3%戊二醛灌注4～5min，取出家兔肾脏，选择受损部位，切成1mm�3组织块，锇酸后固定，常规脱水，环氧树脂包埋，连续半薄切片，甲苯胺蓝染色，光镜下观察，寻找血管破损处，定位后，LKB-V超薄切片机超薄切片，醋酸铀、柠檬酸铅双染色，1200EX透射电镜观察。�
本文为全文原貌 未安装PDF浏览器用户请先下载安装 原版全文 1.6统计学处理对皂苷组和对照组的重出血区、轻出血区、总出血区的出血体密度进行t检验。以上统计学分析均使用SPSS11.5软件完成。�
2 结果�
2.1 大体形态改变两组肾脏都有不同程度的肿胀，其被膜较对侧肾脏紧张，冲击波射入侧可见大小不同，或点状，或成片的被膜下出血，最大直径可达1.60cm。在肾脏切面上可见到直径数毫米至1cm的出血区，在皮质、髓质、肾盂皆可见到，有的可贯穿肾实质。�
2.2光镜观察光镜下两组肾脏皆可见厚度不同的被膜下出血。典型的肾实质损伤按出血程度可分为3个区：严重出血区、散在出血区及管型区。严重出血区内可见大量红细胞，其间有一定量中性粒细胞浸润，其内正常肾组织结构已消失。其周边可见破裂的肾小体，近、远端小管等。散在出血区较严重出血区损伤轻，多位于严重出血区的周边，也可独立存在，其间散在分布红细胞，可见中性粒细胞浸润，不同程度损伤的肾小体，近、远端小管及毛细血管、小叶间血管，甚至弓形静脉，但未发现破损的弓形动脉。管型区可与散在出血区混杂在一起，也可单独存在，其特征为近、远端小管或集合管内均匀红染，高倍镜下有的可分辨出红细胞。光镜下不能区分两组肾脏标本。�
2.3电镜观察在电镜下，两组肾脏标本皆可血管受损，血管壁破裂。破裂处血管内皮损伤，内皮细胞变性、坏死、消失。大量血小板聚集，炎性细胞浸润，血管壁平滑肌细胞坏死、消失。破裂处血细胞外溢到血管周围组织。�
2.4皂苷组和对照组肾脏的体视学比较皂苷组和对照组都可见不同程度的出血，结果显示皂苷组损伤程度轻于对照组，见表1。�
3讨论
ESWL是利用高能量的机械波，经聚合于靶区（F�2）后，诱发强烈的空化效应，产生瞬间的高温和高压，粉碎结石，但同时也对肾组织产生了损害。本研究采用肾动脉灌流法固定肾脏标本，使未受损伤肾脏组织内的血液完全排出，损伤组织清晰显示，以便病理观察和体视学测量。以前的病理研究主要侧重于单纯的病理观察，因取材的部位不同，病理表现亦不同，用足以判断组织损伤的程度。本研究通过对不同出血程度区域精细测量客观的反映了肾脏病理损伤程度。结果显示：人参总皂苷可以减轻HESW所致的肾损伤。分析其原因，除机械作用外HESW致肾损伤的主要机制为空化效应引起的肾血流下降和自由基损伤[4]。空化效应使局部产生高压高温，引起水分子的离解，产生氧自由基；空化效应还引起肾血流下降，使肾脏处于不典型缺血再灌注状态。肾脏缺血时，钙离子大量内流，使细胞内钙离子浓度增加，钙离子激活钙依赖的蛋白酶，此酶使黄嘌呤脱氢酶转变成黄嘌呤氧化酶，当再灌注时带来大量氧时，即催化黄嘌呤与氧反应，产生大量的氧自由基，通过自由基脂质过氧化，引起肾脏的损害，肾组织细胞损伤又使钙离子内流增加，形成恶性循环。人参总皂苷是中药人参的主要药理成分，现已证实它有广泛的药理性作用。它可以通过促进PGI�2释放，抑制TXA�2合成及抑制再灌注期钙内流对缺血再灌注损伤起保护作用[5]。同时，人参总皂苷还通过扩张肾血管提高肾脏对缺血缺氧的耐受力，保护肾小球滤过膜、近曲小管上皮微绒毛及细胞器的完整性。另外，人参总皂苷对肾缺血再灌注时产生的氧自由基有清除作用[6]。因此，笔者认为人参总皂苷可通过其药理作用，减轻高能冲击波所致肾损伤，这与廖勇彬等的研究是一致的[7]。
笔者在研究中还发现散在出血区和管型区肾组织损伤较严重出血区轻，多位于严重出血区的周边。这说明血管的损伤在冲击波引起肾脏损伤机制中占有重要作用，临床上ESWL后患者的血尿也正说明了这一点。在光镜下观察破损血管的连续半薄切片，结合电镜的观察结果认为血管损伤的过程为：首先是自由基损伤血管内膜，内皮细胞变性坏死，然后有血小板聚集，炎性细胞浸润，随着损伤的加剧，管壁细胞也相继变性坏死，最终血管破裂，血细胞外溢到血管周围组织。笔者还观察到肾脏的小叶间动脉也有破坏，动脉的血压要远大于静脉的血压，因而，动脉的损伤在冲击波引起肾脏损伤机制中可能占有重要作用。组织损伤的原因除了冲击波直接的损伤外，血管破坏造成的组织缺血和受压也必然起重要作用。
本研究应用组织学定性观察、体视学定量测量相结合的综合手段评价了人参总皂苷对HESW所致肾损伤保护作用。虽然取得了有一定意义的初步结果，但关于其机制尚需进一步研究。�
参考文献�
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注：“本文中所涉及到的图表、注解、公式等内容请以PDF格式阅读原文。”
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