HPLC法测定上感合剂中黄芩苷的含量|一清颗粒中黄芩苷的含量测定
时间：2019-01-10 04:31:09 来源：达达文档网 本文已影响 人 
[摘要] 目的：建立用高效液相色谱(HPLC)法测定上感合剂中黄芩苷含量的方法。方法：用Diamonsil(钻石) C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）柱，甲醇-0.4%磷酸溶液（50∶50）为流动相，检测波长为278 nm，流速为1.0 ml/min。结果：进样量在30~180 μg范围内具有良好的线性关系；黄芩苷的平均回收率为99.14%，RSD为0.39%（n=6）。结论：该方法快速、方便，能准确检出上感合剂中黄芩苷的含量。
[关键词] 高效液相色谱法；上感合剂；黄芩苷；含量测定
[中图分类号] R917 [文献标识码] A[文章编号]1673-7210（2011）04（b）-050-03
Determination of Shanggan Mixture by HPLC
CHEN Jinying 1, CHEN Zhenyao2
1.The Second People"s Hospital of Zhaoqing City, Guangdong Province, Zhaoqing526060, China;2.The Hospital of Traditional Chinese Medicine of Zhaoqing City, Guangdong Province, Zhaoqing526020, China
[Abstract] Objective: To establish an HPLC method for determining the content of baicalin in Shanggan Mixture. Methods: The DiamonsilC18 (4.6 mm×250 mm, 5 μm) was used, methanol-0.4% phosphoric acid（50∶50）was used as mobile phase, the detective wavelength was 278 nm, flow rate was 1 ml/min. Results: A good linear correlation was obtained when sample content ranged from 30 μg/ml to 180 μg/ml. The average recovery of baicalin was 99.14% with RSD of 0.39%(n=6). Conclusion: This method is quick, convenient, reliable and suitable to assay the content of baicalin in Shanggan Mixture.
[Key words] HPLC; Shanggan Mixture; Baicalin; Assay
上感合剂是根据肇庆�中医院临床医生经验方经剂型改进制成的合剂。本制剂由金银花、连翘、黄芩、桔梗、板蓝根、柴胡、桑叶、防风、山豆根、牛蒡子、前胡、薄荷、陈皮、蒲公英、甘草等经提取加工制成，具有清热解毒、利咽消肿止痛的作用，临床上用于治疗风热犯肺而致的急性咽炎、急性扁桃腺炎，症见咽喉肿痛、咳嗽、痰黄、发热头痛、全身酸痛等，经近20年的临床使用证明本品有较好疗效，但目前该制剂尚未建立含量测定项目。为确保本品疗效和质量，经查阅资料，通过实验，拟对方中主药之一黄芩所含黄芩苷建立高效液相色谱(HPLC)法进行含量测定，以控制该产品的内在质量，并作为本产品再注册质量标准升级的依据之一。
1 仪器与试药
1.1 仪器
WATERS-515型高效液相色谱仪（美国沃特世公司）、FA1004N型电子天平（上海精密科学仪器有限公司天平仪器厂），AS5150AD型超声波清洗器（天津奥特赛仪器有限公司）。
1.2试药
黄芩苷对照品（中国药品生物制品检定所，批号：110715-200514）；上感合剂（肇庆市中医院制剂室，批号：090317，090917，100104）；甲醇为色谱纯，水为纯化水，其他试剂为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱：Diamonsil (钻石)C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流动相：甲醇-0.4%磷酸溶液（50∶50）[1]；检测波长：278 nm；流速1.0 ml/min；柱温：室温；理论塔板数以黄芩苷峰计算为3 300。
2.2 对照品溶液制备
精密称得黄芩苷对照品5.970 0 mg，置10 ml量瓶中，加入甲醇适量，振摇使溶解，再加入甲醇至稀刻度，摇匀，即得浓度为0.597 mg/ml的对照品贮备液。精密量取该对照品贮备液1 ml，置10 ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得浓度为59.7 μg/ml的对照品溶液。
2.3 供试品溶液的制备
精密吸取本品5 ml，置50 ml量瓶中，加甲醇适量，超声处理1 h，放冷，加甲醇至刻度，摇匀，静置，精密吸2 ml置5 ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，放置过夜，用0.45 μm微孔滤膜过滤，即得。
2.4 阴性对照样品溶液的制备
取除黄芩以外处方中药材，按处方制备不含黄芩的阴性样品，并按“2.3”项下方法制备阴性对照品溶液。
2.5 系统适应性试验
分别精密吸取“2.2”、“2.3”、“2.4”、项下溶液10 μl，按“2.1”项下色谱条件进行测定，色谱图见图1。
由图1可见，供试品溶液主峰保留时间与黄芩苷对照品保留时间一致，阴性对照品色谱在黄芩苷峰位置无假阳性峰。黄芩苷与其他组分峰的分离度为1.66。
2.6 线性关系考察
精密吸取“2.2”项下黄芩苷对照品贮备液0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 μl，分别置于10 ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，制得6个梯度的对照品溶液。每种浓度分别按“2.1”项下色谱条件进样10 μl，以峰面积积分值（Y）为纵坐标，黄芩苷进样量（X）横坐标进行线性回归，得回归方程为Y=3 623.5X-1 595.9，r=0.999 7。结果表明，黄芩苷进样量在30~180 μg范围内与峰面积积分值呈良好线性关系。
2.7 精密度试验
精密吸取“2.2”项下黄芩苷对照品溶液，按“2.1”项下色谱条件连续进样6次，每次进样10 μl，结果RSD=1.08%，表明本方法精密度良好。
2.8 稳定性试验
精密吸取同一供试品溶液，分别于0、2、4、6、8、10、12、24 h分别测定。测得黄芩苷峰面积的RSD=0.65%，表明供试品溶液在24 h内稳定。
2.9 重现性试验
取同一批（批号：090317）上感合剂样品5份，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件进样测定，结果黄芩苷含量的平均值为73.19 μg/ml，RSD=0.82%，表明本方法重现性良好。
2.10 加样回收率试验
精密吸取已知含量的样品（批号：090317）6份，每份5 ml，分别精密加入黄芩苷对照品溶液（59.7 μg/ml）0.5、1.0、1.5 ml，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件进样10 μl测定，依法测定黄芩苷含量，计算加样回收率，结果见表1。
表1加样回收率试验结果
2.11 样品含量测定
取样品，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件进样测定含量，结果见表2。
表2 样品含量测定结果（n＝3）
3讨论
吸收波长的选择：采用紫外分光光度法分析黄芩苷对照品溶液及样品溶液的紫外吸收光谱，结果在278 nm处有最大吸收峰，故选择278 nm作为黄芩苷的测定波长[2]。
根据参考文献，用HPLC法测定黄芩苷含量的流动相有多种，有甲醇-水-冰醋酸[3-4]，甲醇-水-磷酸[5]，磷酸-乙腈[6-7]，乙腈-乙酸[8]等，经多次优化，结果选择流动相为甲醇-0.4%磷酸溶液（50∶50）时，供试品中黄芩苷与其他峰的分离度为1.66，分离效果较理想。
由于本制剂中药较多，成分复杂，为了保证提取完全，在采用甲醇超声提取供试液时，本研究设置了超声提取时间为40、60、80 min，结果显示，超声60 min时黄芩苷已提取完全。
本方法测定上感合剂中黄芩苷的含量，方法简便、准确，结果稳定，可用于控制该合剂的质量。
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(收稿日期：2011-01-27)
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