不同保存条件下乳腺癌石蜡切片PR、ER和HER-2状态的变化
时间：2021-02-05 10:03:55 来源：达达文档网 本文已影响 人 
罗胜 宋彦锟
【摘要】 目的：探究乳腺癌標本于不同条件下保存对石蜡切片免疫组化指标PR、ER和HER-2表达的影响。方法：择取2018年1月-2019年1月笔者所在医院病理科42份乳腺癌标本为研究对象，取新鲜样本石蜡包埋连续切片，免疫组化测定PR、ER和HER-2。另获取乳腺癌标本浸润部分组织，分别于超低温、低温和室温条件下密封保存，并于12个月后复行免疫组化测定PR、ER和HER-2。观察三种保存条件下组织样本与新鲜样本的免疫组化测定结果及指标信号强度变化。结果：-80 ℃超低温保存样本中，PR、ER和HER-2阳性表达强度与新鲜样本一致，1例ER 3+样本信号降至2+，余同金标准一致。4 ℃低温保存样本中，PR信号减弱和消失14份，ER信号减弱和消失12份，HER-2信号减弱和消失13份。20 ℃室温保存样本中，仅4例PR，5例ER，7例HER-2表达信号与金标准相符，余不同程度减弱或消失。结论：乳腺癌石蜡切片超低温蜡封保存可以有效隔绝氧化，维持良好的组织表面抗原性，对PR、ER和HER-2状态影响较小，免疫组化检测可行性高，效果优于低温和常温保存。
【关键词】 乳腺癌 石蜡切片 保存条件 免疫组化
doi：10.14033/j.cnki.cfmr.2020.21.059 文献标识码 B 文章编号 1674-6805（2020）21-0-02
Changes of PR， ER and HER-2 Status in Paraffin Section Breast Cancer under Different Storage Conditions/LUO Sheng， SONG Yankun. //Chinese and Foreign Medical Research， 2020， 18（21）：
-144
[Abstract] Objective：
To investigate the effect of breast cancer specimens stored under different conditions on the expression of immunohistochemical indexes PR， ER and HER-2 in paraffin sections. Method：
From January 2018 to January 2019， 42 breast cancer specimens from the pathology department of our hospital were selected as research subjects. Fresh samples were embedded in paraffin-embedded serial sections， and PR， ER and HER-2 were determined by immunohistochemistry. Partially infiltrated tissues were obtained from breast cancer specimens， which were sealed and stored at ultra-low temperature， low temperature and room temperature， respectively， and PR， ER and HER-2 were determined by immunohistochemistry after 12 months. The immunohistochemical results of tissue samples and fresh samples under the three storage conditions were observed， and the changes in the signal intensity of the indicators were observed. Result：
The positive expression intensity of PR， ER and HER-2 in cryopreserved samples at -80 ℃ was the same as that in fresh samples， the signal of ER3+ in one sample decreased to 2+， and the rest was the same as that in gold standard. In the samples stored at 4 ℃ at low temperature， the PR signal decreased and disappeared in 14， ER signal decreased and disappeared in 12， and HER-2 signal decreased and disappeared in 13. Only 4 PR， 5 ER and 7 HER-2 signals in 20 ℃ room temperature preserved samples were consistent with the gold standard. Conclusion：
Preservation of ultra-low temperature wax seals for breast cancer paraffin sections can effectively isolate oxidation and maintain good tissue surface antigenicity. It has little effect on the status of PR， ER and HER-2. Immunohistochemical detection is highly feasible and the effect is better than low temperature and normal temperature preservation.
[Key words] Breast cancer Paraffin section Storage conditions Immunohistochemical
First-authors address：
The First Affiliated Hospital of Fujian Medical University， Fuzhou 350005， China
乳腺癌是女性常见恶性肿瘤。流行病学统计显示，乳腺癌发病率居我国女性恶性肿瘤第一位，死亡居第六位，年发病和死亡人数分别占世界的12%和10%，且受多种因素影响，我国乳腺癌发病率增长速度超全球平均水平2倍以上，疾病形势严峻，是严重威胁女性生命健康的公共卫生问题[1]。因此，为提高检测结果准确性，避免不必要的组织浪费，临床常在组织切片时保留未染色切片[2-3]。为探究理想的组织切片长期保存条件，保证免疫组化检测质量，本文择取笔者所在医院病理科乳腺癌标本，观察石蜡切片在不同保存条件下的免疫组化指标改变情况，报道如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料
择取2018年1月-2019年1月笔者所在医院病理科42份乳腺癌标本为研究对象。纳入标准：病理组织学检查证实为浸润性乳腺癌的根治手术切除样本;新鲜病理样本免疫组化检查研究指标均呈阳性且无明显异质性。患者对本研究均知情同意。
1.2 方法
1.2.1 仪器与试剂 DAKO公司Envision检测系统、兔抗人PR单克隆抗体（克隆号1E2）、兔抗人ER单克隆抗体（克隆号SP1）、兔抗人HER-2单克隆抗体（克隆号4B5）、免疫组化EliVison试剂盒、Leica RM2254石蜡切片机、Olympus BX53荧光显微镜等。
1.2.2 操作方法 取新鲜浸润乳腺癌手术标本，制成5 mm×
3 mm×3 mm组织块，酒精梯度脱水，石蜡包埋，上切片机以
3 μm厚度连续切片，选择肿瘤组织丰富区域的切片样本，免疫组化测定PR、ER和HER-2。通过HE染色镜下观察，确定乳腺癌浸润组织并标记位点，以组织芯片仪打孔钻取组织柱，将获取的样本移至受体蜡块上，送入电热恒温烤箱，55 ℃烘烤至半融化状态（60～90 min），取出后室温冷却，组织芯片蜡块制备完成。将制作好的蜡块上切片机以3 μm厚度连续切片9张，分成3组，3张/组，贴附于黏附载玻片（表面带正电荷），电热恒温烤箱55 ℃烤片3 h后，分别于超低温（-80 ℃蜡封）、低温（4 ℃）和室温（20 ℃）条件下密封保存。12个月后取样，复行免疫组化测定PR、ER和HER-2。将组织切片脱蜡至水，采用预处理液80 ℃浸泡10 min，去离子水漂洗5 min，自然晾干，胃酶37 ℃消化30 min，同法漂洗晾干，酒精梯度脱水后变性杂交，室温下暗处，以0.3%乙基苯基聚乙二醇（NP-40）刷洗组织切片，再以70 ℃浸泡5 min，复染荧光染料DAPI送于显微镜下观察。
1.3 观察指标及评价标准
由病理科两名资深医师共同完成结果判读，乳腺癌研究样本与新鲜样本PR、ER免疫组化结果判读参照ACSO/CAP《乳腺癌患者雌激素受体及孕酮受体免疫组织化学检测指南》（2010版）[5];乳腺癌研究样本与新鲜样本HER-2免疫组化荧光原位杂交检测结果判读参照《乳腺癌HER-2检测指南》（2014版）[5]。
1.4 统计学处理
以SPSS 21.0软件进行数据分析，计数资料以率（%）表示，采用字2检验，P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
以手术切除新鲜样本免疫组化检测结果为金标准，-80 ℃超低温保存样本中，PR与HER-2阳性表达强度及范围均同金标准，1份ER 3+样本信号降至2+，余同金标准。4 ℃低温保存样本中，PR信号一般减弱（3+降至2+，或2+降至1+）7份，明显减弱（3+降至1+）3份，信号消失（任意+降至-）4份;ER信号一般减弱4份，明显减弱1份，信号消失7份;HER-2信号一般减弱3份，明显减弱6份，信号消失4份。20 ℃室温保存样本中，仅4份PR，5份ER，7份HER-2表达信号与金标准相符，余不同程度减弱或消失，见表1。新鲜样本与研究样本HER-2免疫组化结果对比见图1。
注：a为新鲜样本HER-2（2+）;b为研究样本HER-2（2+）。
3 讨论
甲醛固定石蜡包埋是临床处理病理组织块的常用方法，不仅可以达到支持增硬的作用，还可以很好地防止组织自溶与抗原扩散，从而长时间保存组织核酸及抗原，为病理检测提供可靠样本[6]。但随着保存時间的延长，组织切片仍会不可避免地受环境因素影响而逐渐发生氧化改变，是导致免疫组化和分子检测假阴性结果的重要原因[7-8]。有报道指出，光作用、热作用及环境中的化学因子作用均会对组织抗原活性造成影响[9]。另有研究证实，连续紫外线照射、长时间或高温烘烤，会造成组织切片抗原丢失[10]。
为延长组织切片有效保存时间，保证病理检测与指标判读准确，本研究对理想的样本切片保存条件进行探究。研究统一采用组织芯片进行样本保存，有利于质量控制，减少试验误差，同时节约试剂和材料[11-12]。研究结果显示，不同条件下保存12个月的乳腺癌石蜡切片样本，DNA保存均良好，可以检测到组织抗原，但抗原活性均存在不同程度改变。其中，室温和低温条件下保存的组织样本免疫组化指标PR、ER和HER-P改变较为明显，特别是室温下保存样本，绝大多数信号明显减弱甚至消失，提示氧化作用的存在。而超低温蜡封保存PR与HER-2阳性表达强度及范围同金标准一致，ER同金标准基本一致，提示超低温蜡封保存对隔离氧化、保持组织表面抗原更具有效性与可行性。另有研究证实，蜡封联合低温的保存方法可以有效保存稳定抗原，获得与新鲜切片表达强度一致率超过90%的保存效果。
