消肿止痛膏的制备及质量控制
时间：2021-04-23 08:02:29 来源：达达文档网 本文已影响 人 
[摘要]目的 研究消肿止痛膏的制备工艺及质量控制标准。 方法 以大黄、红花、黄柏等十多味中药制成消肿止痛软膏，并采用薄层色谱法对处方中的大黄、红花、黄柏进行定性鉴别；采用高效液相色谱法测定栀子苷的含量。结果 用薄层色谱法能鉴别出黄柏、大黄、红花的含量测定。 结论 本品处方组成合理，制备简单，质量控制方法简单易行。
[关键词]消肿止痛膏；制备；质量控制
[中图分类号] R283 [文献标识码] B [文章编号] 2095-0616（2013）04-53-03
消肿止痛膏是由大黄、红花、黄柏等十多味中药味中药组成，具有清热解毒，活血消肿止痛功效，能快速改善关节局部症状，减轻患者痛苦，缩短疗程[1-2]。主要用于各种关节炎伴有肿痛时的局部配合治疗[3]。本研究根据多年临床经验，在传统外治验方基础上重新进行组方制备，并对方中主药大黄、红花、黄柏进行了薄层色谱（TLC）鉴别，并对方中主要栀子进行分析，采用高效液相色谱（HPLC）法测定栀子苷的含量并报道如下。
1 材料与方法
1.1 药物处方组成
主药为大黄、红花、黄柏，配药：泽兰、黄芩、熟石膏、薄荷、山栀子、红条紫草、芙蓉叶、冰片、樟脑等十多味药组成。
1.2 制备方法[3-4]
药物处理：将上述药物大黄、黄柏、 黄芩、熟石膏、山栀子几味药放于烘箱内 80℃干燥，粉碎过100目筛；将红花、泽兰、薄荷、红条紫草、芙蓉叶加水煎煮，第1次40 min，第2次30 min，合并煎液，滤过，滤液浓缩，后加入乙醇，使乙醇量达60%，静置24 h，滤取上清液，再转移至蒸发皿内继续浓缩至稠膏状，浓缩之比重1.1～1.15，约150 mL浓浸膏，备用。取凡士林、单脂酸甘油酯、吐温-80，搅拌均匀，在直火上加热，逐渐升温，并不断搅拌，加热至100℃左右，呈白色糊状体。再逐渐降温至72℃，并经常翻动，至渐呈透明黏稠体时，分次加入大黄、黄柏等细粉，边加边搅拌。加完后应为黄褐色黏稠体。保持温度在 70℃以下，兑入浸膏（放置降温至60～70℃）。搅匀，制成1 000 g，分装，100 g/份，即得。
2 功能与主治
具有清热解毒，活血消肿止痛功效，能快速改善关节局部红、肿、热、痛的症状，减轻患者痛苦，缩短疗程。
3 质量控制标准
3.1 性状
本品为黄褐色软膏，气香味苦。
3.2 标本要求
取少量本品通过细菌培养等方法进行无菌检查，本品中不得含有金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌和大肠杆菌等病菌。
3.3 试验动物要求
常规去毛、备皮，面积约2.5 cm×2.5 cm，24 h后将本品0.5 g均匀涂擦，观察24 h内皮肤有无水疱、发疹、发红等现象。
3.4 稳定性检查[5]
将软膏放入恒温箱（39±1）℃，或室温（25±3）℃ 1个月，要求其黏稠度、色泽、均匀性、酸碱度不得有变化，无霉败现象。
3.5 薄层色谱（TLC）鉴别[6-8]
3.5.1 仪器与药材 Waters高效液相色谱仪，包括1525输液泵，2996型PDA检测器（美国），消肿止痛膏；4种阴性样品（湖南永州市中医院提供）；盐酸小檗碱对照品、大黄素对照品、大黄酚对照品、大黄酸对照品、三七皂苷R-对照品、人参皂苷R-对照品和人参皂苷R-对照品（均购于中国药品生物制品检定所，20060423，20060424，20060425）；乙腈为色谱纯，水为纯化水，其他试剂均为分析纯。
3.5.2 方法[9-11] 黄柏：取本品10 g，加甲醇50 mL，搅匀，加热回流1 h，密塞，冷藏4 h后，过滤，滤液作为供试品溶液；另取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每1毫升含0.2 mg的溶液，作为对照品溶液；取缺黄柏药材的阴性样品10 g，按供试品溶液制备方法制得阴性对照品溶液。吸取上述3种溶液各5 L，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯一丁酮-甲酸-水（10︰6︰1︰1）为展开剂[3]，展开，取出，
干，置紫外灯（356 nm）下检视。大黄于相同方法取药液并加入盐酸，加热水解30 min，冷却后用乙醚提取2次，每次10 mL。供试品由乙醚提取后的残渣加入乙酸乙酯溶解而成。然后选取大黄酚做对照品溶液，阴性对照品溶液制取同上。大黄检视前的展开剂为石油醚（30～60℃）-甲酸乙酯-甲酸（15︰5︰1）。取10 g微热后软化的三七，加石油醚（30～60℃）50 mL，超声处理20 min，取40 mL正丁醇再次进行20 min的超声处理，4 h冷藏后用氨水洗涤，再用正丁醇饱和的水洗涤2次，将蒸干的残渣加1 mL甲醇溶解而成供试品。取人参皂苷R1作对照品，三七检视前的展开剂为三氯甲烷-甲酸乙酯-甲醇-水（15︰40︰22︰10），要求在10℃以下放置，喷洒10%硫酸乙醇，在加热到105℃时清晰显示。详见图1～3。
3.6 栀子苷含量测定（HPLC法）[12]
3.6.1 色谱条件及系统适应性试验 色谱柱：Hypersil BDS C18柱（200 mm×4.6 mill，5 µm）；流动相：乙腈一水（11︰89）；检测波长：238 nm；流速：1.0 mL/min；柱温：室温；进样量：10 µL。精密吸取对照品溶液、供试品溶液和阴性对照品溶液各10 L，注入高效液相色谱仪，时间为10.2 min，分离度为10.16，理论塔板数为8002，其他成分对栀子苷的测定无干扰，色谱图见图4。
3.6.2 溶液制备 取栀子对照品16.80 mg，置100 mL量瓶中，摇匀，作为对照品溶液备用。加热回流60 min，10℃放冷，称定质量，用50%甲醇溶液补足减失的质量，摇匀，滤过，弃去初滤液，取续滤液过微孔滤膜（0.45 μm），即得供试品溶液。精密称取按处方及制备工艺制备的不含栀子的阴性样品1.0 g，按照供试品溶液制备方法制备阴性对照品溶液。
3.6.3 方法学考察 线性关系：精密吸取质量浓度为0.168 mg/mL的栀子苷对照品溶液2.00 mL，分别置50，25，10，5 mL量瓶中，加50%甲醇溶液稀释至刻度，摇匀。取10μL注入液相色谱仪，得回归方程为y=4 484.833+1 183 597.153X，r=0.999 96，结果表明栀子苷进样量在0.067 2～1.68μg范围内与峰面积线性关系良好。并进行精密度试验、重现性试验和加样回收试，结果见表1。
3.6.4 样品含量测定 取3批样品（湖南省永州市中医院制剂室生产），按样品供试液制备方法制备，测定栀子苷含量。 结果为3批样品中栀子苷含量分别为1.874，2.123，1.775 mg/g。
4 讨论
本研究为建立本品的薄层色谱试验，在其试验的方法上，着重考虑样品预试验、展开系统、展开时的温度和相对湿度，以利确定重复性好、专属性强的方法。本实验各项试验效果满意。由于本品药味较多，成分比较复杂，本研究只对其进行了质量定性分析，其定量分析有待进一步探讨研究。
[参考文献]
[1] 国家药典委员会.中国药典（一部）[M].北京：化学工业出版社，2005：附录12，附录31-32.
[2] 彭成.中药药理学[M].北京：中国中医药出版社，2012：133.
（下转第页）
（上接第页）
[3] 国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部） [M].北京：化学工业出版社，2005：214-215，17-18，10-11.
[4] 叶应妩.全国临床检验操作规程[M]. 第3版.南京：东南大学出版社，2006：178.
[5] Lee ST，Weykamp CW，Lee YW，et al. Effects of 7 hemoglobin variants on the measurement of glycohe- moglobin by 14 analytical methods[J].Clin Chem，2007，53（12）：2202-2205.
[6] Manea L，Masala B.Disorders of the synthesis of human fetal hemoglobin[J].IUBMB Life，2008，60（2）：94-111.
[7] Roberts WL，Safar-Pour S，De BK.Effects of he moglobin C and S traits on glycohemoglobin measure-ments by eleven methods[J].Clin Chem，2005，51（4）：776-778.
[8] Rohlfing CL，Connolly SM，England JD，et al.The effect of elevated fetal hemoglobin on hemoglobin Alc results：five common hemoglobin Alc methods compared with the IFCC reference method[J].Am J ClinPatho1，2008，129（5）：811-814.
[9] Nuttall FQ.Comparison of percent total GHb with percent HbAlc in people with and without known diabetes [J].Diabetes Care，1998，21（9）：1475-1480.
[10] Bry L，Chen PC，Sacks DB.Effects of hemoglobin variants and chemically modified derivatives on assays for glycohemoglobin[J].Clin Chem，2001，47 （2）：153-163.
[11] Frank EL，Mouhon L，Little RR，et al.Effects of hemoglobin C and S traits on seven glycohemoglobin methods[J].Clin Chem，2000，46（6）：864-867.
[12] 王晨.云南白药制剂研究进展[J].中国民族民间医药，2012，21（7）：36-37.
（收稿日期：2013-01-17）
