[盐酸普罗帕酮在中毒大鼠体内的死后再分布研究] 盐酸普罗帕酮片
时间：2019-01-23 04:41:28 来源：达达文档网 本文已影响 人 
摘要：目的 观察盐酸普罗帕酮在中毒大鼠体内的死后再分布规律。方法 雄性大鼠30只，按LD50（0.876 g/kg）灌胃，2 h后处死，置于20℃保存，不同时间（0、4 h、8 h、24 h、48 h、72 h）各取4只，采取脑、心、肺、肝、脾、肾、肌肉、心血、外周血，pH11，乙醚萃取，点于HSGF254板上，正庚烷∶三氯甲烷∶无水乙醇∶乙酸乙酯∶甲醇（5∶2∶2.5∶1.5∶2.5）展开，薄层色谱扫描法检测，Rf值和光谱扫描图定性，外标两点法定量。结果 20 ℃保存时大鼠体内盐酸普罗帕酮浓度变化明显，死后8 h心血在PPF含量显著升高（6.967±1.697） μg/mL，死后大鼠心肌、心血、外周血中盐酸普罗帕酮含量变化较脑、肌肉明显。结论 盐酸普罗帕酮在中毒大鼠体内可发生死后再分布，盐酸普罗帕酮中毒死亡法医学鉴定中应考虑其死后再分布问题。
关键词：普罗帕酮 ；中毒 ；死后再分布;大鼠
中图分类号：R972 文献标识码：A 文章编号：1672-1349（2011）07-0856-02
普罗帕酮（Propafenone，PPF），又名丙苯酮（Bexarytmon），主要用于致命性室性心律失常，也有致心律失常作用，常引起中毒死亡［1-9］。普罗帕酮脂溶性强，表观分布容积较大，从理论上讲易发生死后再分布［10，11］。有关普罗帕酮死后再分布的研究未见报道。本文采用大鼠群体模型研究盐酸普罗帕酮在中毒大鼠体内的死后再分布规律，为普罗帕酮中毒的法医学鉴定提供科学依据。
1 材料与方法
1.1 试剂与药品 PPF标准药品：盐酸普罗帕酮（纯度98%）购自中国药品和生物制品检验鉴定所，其余为分析纯。标准液：500 μg/mL，盐酸普罗帕酮对照乙醇溶液，4 ℃冰箱保存。 盐酸普罗帕酮片剂：每片50 mg，产地上海医药集团有限公司信宜制药总厂（批号：051003）
1.2 实验动物 Wistar大鼠，雄性，30只，体重200 g±10 g。
1.3 主要仪器检测条件 CS-930 薄层色谱扫描仪：光谱扫描：Difference扫描方式；色谱扫描：单波长锯齿扫描，λ1 304 nm,λ2360 nm，SX3，记录峰面积。
1.4 薄层层析条件 薄层板：HSGF254 10 cm×10 cm×0.25 mm；展开剂∶正庚烷∶三氯甲烷∶无水乙醇∶乙酸乙酯∶甲醇（5∶2∶2.5∶1.5∶2.5），500 μL浓氨水饱和10 min，上行展开5 cm～7cm。
1.5 实验动物模型 雄性大鼠30只，称重，按PPF LD50（0.876 g/kg）灌胃，观察表现。灌胃后2 h处死。置于20 ℃保存，于不同时间（0、4 h、8 h、24 h、48 h、72 h）随机取4只解剖，取脑、心、肺、肝、脾、肾、肌肉、心血和外周血，按下述方法检测其中PPF含量。
1.6 薄层扫描响应曲线和扫描精度 取PPF标准（0.1 μg、0.2 μg、0.4 μg、1.0 μg、2.0 μg、4.0 μg 、8.0 μg 、12.0 μg 、16.0 μg）点板，展开，扫描，已斑点内PPF含量（X，μg/斑点）和斑点扫描面积积分值（Y）进行回归，建立PPF薄层扫描响应曲线。以PPF标准溶液（1.0 μg、4.0 μg）同一薄层板和不同薄层板重复点样，展开。一次扫描，计算板内和板间扫描（面积）精密度；同一斑点日内不同时间重复扫描5次，计算日内扫描（面积）精密度。
1.7 检材处理 取待测组织匀浆（1∶3）1 mL或血液250 μL，同时取空白检材两份（肝或血液），加入PPF标准溶液8 μL和16 μL；加入蒸馏水1 mL、pH11硼酸-碳酸钠缓冲液1 mL、乙醚5 mL，震荡15 min，1 800转离心5 min，分离有机层。乙醚5 mL重新萃取一次；合并萃取液，40℃水浴氮气流下挥干。25 μL乙醇定容，取20 μL点样。
1.8 工作曲线 取待测组织匀浆1 mL和血液250 μL各9份，分别加入0.125 μg、0.25 μg、0.5 μg、1 μg、2.5 μg、5 μg、10 μg、15 μg、20 μg PPF，按前述方法提取展开和扫描。以斑点扫描面积积分值（X）和PPF含量（Y,μg/mL）进行回归，建立标准曲线回归方程，确定线性检测范围和最低检出浓度。
1.9 回收率 分别于2 mL空白检材中添加不同剂量PPF，按1.7、1.4项提取、展开、扫描，标准曲线法检测样品中PPF浓度，计算回收率。
1.10 样品检测 按1.7项提取，展开后，紫外灯下确定斑点位置，光谱扫描结合Rf值定性，色谱扫描外标两点法或工作曲线法定量。
1.11 统计学处理 采用SPSS11.5统计软件处理，计量资料以均数±标准差（x±s）表示。
2 结果
2.1 薄层色谱 PPF薄层层析Rf值为0.45；光谱扫描吸收波长为210 nm，250 nm，310 nm；色谱扫描显示PPF斑点扫描峰形对称，PPF与检材提取物中杂质完全分离。采用碘化铋钾显色，PPF斑点呈橙黄色，灵敏度为每斑0.1 μg。
2.2 薄层扫描响应曲线和扫描精密度 PPF薄层扫描响应曲线回归方程为：Y12 539X+19 803（r0.9869，P-5X（r0.9992 ）。线性检测范围为 0.1～6 μg/mL，最小检出浓度0.05 μg/mL 。肝中PPF检测工作曲线回归方程为： Y－0.743+4.823×10-5X（r0.9782 ）。线性检测范围为（0.1～6） μg/mL，最小检出浓度0.1 μg/mL 。
2.4 提取回收率 空白血中添加PPF的提取回收率为101.5%±3.7%（0.5 μg/mL，n5），96.4%±3.2%（2 μg/mL，n5），94.4%±3.0%（4 μg/mL ，n5）。空白肝中添加PPF的提取回收率为91.2%±4.6%（0.5 μg/mL，n5），89.7%±5.1%（2 μg/mL ，n5），86.4%±5.3%（4 μg/mL ，n5） 。
2.5 灌胃后大鼠中毒反应 30只大鼠按LD50（0.876 g/kg）剂量灌胃后，30 min内即出现抽搐、站立不稳，呼吸困难、心跳加快等症状，6只大鼠抽搐后死亡，未死大鼠抽搐现象在1 h～2 h内有不同程度缓解。
2.6 死亡当时大鼠体内PPF含量
2.7 死后不同时间各组织中脏器和体液PPF含量（见表1） 20 ℃保存8 h后大鼠心血中PPF含量明显升高（P＜0.05）；48 h后外周血中PPF含量明显降低（P＜0.05）。
表1 死后不同时间各组织中脏器和体液PPF含量（x±s）μg/mL
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3 讨 论
中毒死后药（毒）物浓度不一定反应死亡当时的药物浓度，死后再分布对死后体内药（毒）物浓度的影响越来越受到重视。许多药物都存在死后再分布，碱性、亲脂性毒物具有较大的分布容积（Vd），毒物容易发生死后再分布现象［10，11］。PPF脂溶性较强，口服吸收快，分布、消除慢［12］，应较易发生死后再分布，但目前尚未见报道。
本实验结果显示，死后20 ℃保存8 h心血中PPF含量显著升高。说明PPF在中毒大鼠体内存在死后再分布现象。一般认为，死后再分布的形成机制有顺梯度浓度扩散、死后循环、毒物的降解和破坏及微生物的作用［13］。顺梯度浓度扩散，包括死后毒物从富集器官或组织逐渐释放扩散到邻近组织和肠道中残留毒物扩散到周围组织，这可能是毒物死后再分布的主要机制［13］。本实验结果显示，灌胃后2 h肺组织中PPF含量（28.327±2.30） μg/g，达其心血中含量（6.444±0.596） μg/g的4.4倍，顺梯度浓度扩散可能是其死后再分布的主要机制之一，但还需进一步实验证实。
因此，对盐酸普罗帕酮中毒和死亡案件进行法医学鉴定时，应在8 h内进行尸检，不能及时测尸检时，应及时冷冻保存尸体，分析毒物结果时应考虑到死后再分布对血中PPF含量的影响。
参考文献:
［1］ Huang YM,Lee WR,Hu CH,et al.Propafenone-induced acute generalized exanthematous pustulosis［J］.Int J Dermatol，2005,44（3）:256-257.
［2］ Stancak B,Markovic P,Rajnic A,et al.Acute toxicity of propafenone in a case of suicidal attempt［J］.Bratisl Lek Listy，2004,105（1）:14-17.
［3］ Palette C,Maroun N,Gaulier JM,et al.Fatal poisoning with propafenone:A case report documented with blood concentration levels［J］.Therapie，2003,58（4）:384-387.
［4］ Clarot F,Goulle JP,Horst M,et al.Fatal propafenone overdoses:case reports and a review of the literature［J］.J Anal Toxicol，2003,27（8）:595-599.
［5］ Picciotto G,Siragusa V,Cellura M,et al.Acute propafenone poisoning.Description of a case［J］.Minerva Cardioangiol，1990,38（12）:555-558.
［6］ 辛海莉，熊永娣.心律平中毒致死一例［J］.药物与临床,2001,16（1）：55-56.
［7］ 田会欣,张志强.心律平急性中毒致休克1例［J］.中国临床医生,2002,30（6）：59.
［8］ �克明,郑金平,王玉瑾,等.薄层色谱扫描法检测普罗帕酮中毒者血药浓度［J］.中国医院药学杂志，1999,19（4）:195-197.
［9］ 刘巧玲.心律平急性中毒临床分析［J］.中国冶金工业医学杂志，2005,22（1）：31-33.
［10］ Yarema MC,Becker CE.Key concepts in postmortem drug redistribution［J］.Clin Toxicol（Phila），2005,43（4）:235-241.
［11］ Pélissier-Alicot AL,Gaulier JM,Champsaur P,et al.Mechanisms underlying postmortem redistribution of drugs［J］.J Anal Toxicol，2003,27（8）:533-544.
［12］ 张先洲.心律失常患者中心律平药动学研究［J］.中国医院药学杂志，1994，14（1）：5-7.
［13］ 黄光照,汪德文.法医毒理学［M］.第3版.北京:人民卫生出版社,2004:21-22.
作者简介:刘永涛（1982―），男，现为山西医科大学法医学院硕士研究生（邮编：030001）；姜涛、�克明（通讯作者），工作于山西医科大学（邮编：030001）。
（收稿日期：2011-04-22）
（本文编辑 王雅洁）
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