重医临床疫重点整理

　 1.抗 原 抗 体 反 应 的 原 理：

　1.AgAb能特异性结合：（内因）

　2.AgAb结合的动力：（外因）静电力 范德华力 氢键 疏水作用力

　2.抗原抗体反应的特点：1.特异性、交叉反应(cross-reaction)2.最适比例3.可逆性

　3.影响抗原抗体反应的主要因素自身因素：1. Ag：与Ag的理化性质、抗原表位的数目及种类有关；2. Ab：与Ab的来源有关：是R 型抗体或H型抗体；与Ab的特异性、亲合性有关； 与Ab的浓度有关。外界环境条件：1．电解质 2．PH 3．温度

　4.抗原抗体反应分哪些种类？沉淀反应； 凝集反应；补体参与的溶血反应、补体结合试验：中和试验;三大标记技术

　5.什么是交叉反应，有无特异性，为什么？在临床上有何意义？

　交叉反应(cross-reaction)----抗体对具有相同或相似抗原表位的抗原发生的反应称为交叉反应。交叉反应并没有违背Ag、Ab特异性结合的原则，其产生的先决条件是存在共同Ag表位。

　交叉反应的意义：1. 免疫学诊断：（利用交叉反应）eg 外斐氏反应等:利用变形杆菌OX19、OX2、OXk作Ag检查血清中Ab，诊断斑疹伤寒（立克次氏体感染所致）2.可造成免疫病理损害：eg 链球菌感染后易导致肾小球肾炎，其原因为链球菌与人体肾小球基底膜有共同的Ag表位所致。

　6.双扩、单扩、对流免疫电泳、免疫电泳实验的原理，方法，用途。

　原理：可溶性抗原与相应抗体在电解质存在下，在琼脂基质中扩散，当两者相遇，比例恰当时结合，出现肉眼可见的沉淀线。

　双扩方法：制备琼脂板、打孔、加样、扩散、用途：1.已知Ag或Ab测未知Ab或Ag（双孔型）2.抗原性质分析（三角孔型）3.测Ag有效稀释度（梅花孔型）

　单扩方法：已知抗体+琼脂混合制板、打孔，在琼脂板小孔中加梯度抗原，抗原向四周扩散形成沉淀环，抗原浓度与沉淀环直径呈线性关系绘制标准曲，从标准曲线上查出并计算待测标本含量。用途：定量测定可测 IgG、IgA、IgM、C3 等含量。

　对流免疫电泳（counter -immunoelectrophoresis)原理：定向加速的免疫双扩（双扩＋电场，使抗原、抗体相对泳动）方法：抗原、抗体分别在琼脂板上不同孔内，抗原在负极端，抗体在正极端，电泳。电压：4~6v/cm(琼脂长度）电泳时间：45分钟~1小时。用途用于HBsAg、AFP等检测。

　免疫电泳（immunoelectrophoresis)原理：区带电泳＋双扩结合。方法：1.Ag电泳分出区带（当时看不到）2.Ag、Ab免疫双扩。用途：常用于分析复杂Ag的组分。（如人全血清组分的分析）

　7.影响电泳的因素有哪些？1.与溶液的pH有关：常用pH8~9，蛋白质带负电 2.与溶液离子强度有关：愈高，泳动慢，一般0.02~0.2M 3.与电场强度有关：愈高，愈快，一般4~6v/cm（琼脂长），约40v左右4.电渗作用的影响：电场中液体 对于一固体的固定相对移动的现象。电渗方向与电泳方向相反。

　8.玻片凝集试验和试管凝集试验的区别

　玻片法用已知抗体检测未知抗原，定性试验，用途：ABO血型鉴定、菌种鉴定。试管法用已知抗原测未知抗体的效价。属半定量试验。

　9.反向间接凝集试验、间接凝集抑制试验的原理及实例：

　反向间接（血、胶乳）凝集试验原理：将已知抗体吸附于载体上，检测未知抗原。如：反向间接血凝检测HBsAg 、AFP等

　间接凝集抑制试验原理：待测样本（可溶性Ag？）+已知Ab，反应一段时间后，+已知致敏Ag颗粒（已成为颗粒性Ag），观察是否有凝集现象。不凝集为阳性，凝集为阴性。如：用胶乳凝集抑制试验检测小便中绒毛膜促性腺激素（HCG）

　协同凝集试验的原理：实质为反向间接凝集反应葡萄球菌A蛋白（Staphylococcus protein A, SPA)能非特异地与IgG的Fc段结合,当与特异性抗原相遇时，IgG的Fab段与抗原结合，出现金葡菌的凝集现象（属特殊间接凝集试验）

　10.比较沉淀试验和凝集试验的异同：抗原性质：可溶性Ag、颗粒性Ag；稀释对象：抗原、抗体；结果现象：沉淀现象、凝集现象；敏感性：低 、高。

　11.免疫标记技术的原理

　用可以微量检测的标记物（示踪物质）标记抗原或抗体，作为试剂，与相应抗体或抗原结合反应后，测定抗原抗体复合物中的标记物，从而推断所测抗体或抗原有无及量的多少

　12.免疫荧光技术中最常用的荧光素是什么？

　1.异硫氰酸荧光黄( Fluorescein isothiocyanate , FITC)可发出黄绿色荧光2.四乙基罗丹明（rhodamine, RB20)发出橘红色荧光3.四甲基异硫氰酸罗丹明(tetramethylrhodamine isothiocyanate,TRITC)发出橙红色荧光

　13.免疫荧光显微染色的各种方法及优缺点

　1.直接法:快、直接、干扰因素少;用于检测抗原;每检测一种抗原要标记一种荧光抗体,较麻烦。

　2.间接法：优点：制备一种荧光抗体（抗抗体）可用于多种Ab检测；灵敏度高。

　3.补体法：灵敏度高，制备一种荧光抗补体用于多种检测；干扰因素多，补体不稳定，少用。4.双标记法。免疫荧光显微技术优缺点优点：1.特异性、敏感性高2.快速3.可定位4.既可测Ag又可测Ab。缺点：1.需要荧光显微镜2.有非特异荧光干扰3.定性测定、判断结果不客观4.片子难保存（荧光猝灭）

　ELISA 的原理、方法（以间接法测抗体和双抗夹心法为例）及影响因素。

　原理：将酶分子与Ab或Ag连接成一酶结合物（酶标记物），当它与固相载体中相应Ag或Ab相遇，形成酶标记的AgAb复合物，加入底物，酶催化底物，生成有色产物，根据颜色深浅可测出溶液中Ag或Ab的量。

　双抗体夹心法步骤：包被已知Ab-洗涤-加待测标本（测Ag？）-洗涤-加酶标Ab-洗涤-加底物-加终止液-观察结果。

　间接法：步骤：包被已知Ag＋待测标本（Ab？）-反应一段时间后，洗涤-加酶标抗抗体（酶标羊抗人IgG）-洗涤-加底物-加终止液 ，观察结果。

　ELISA试验的影响因素:

　（一）固相载体：酶标板要求：吸附性能好、空白值低、透明度高，板批间、孔间性能相近 。

　（二）抗原、抗体Ag：需纯化Ab：需效价高、亲和力强、纯化

　（三）试验条件1.包被：一般用pH 9.6 CB(carbonate buffer)，0.05M, 有利于蛋白质吸附。包被浓度： 0.1~100g/ml，一般常用10ug/ml;包被时间、温度： 4 ℃过夜或37 ℃1-3h包被量：100ul封闭：用0.1~5% 牛血清白蛋白缓冲液浸泡 0.5小时2.抗原抗体反应的条件。（1）微碱性有利于抗原抗体结合，故用pH 7.4 PBS(phosphate buffer saline)洗涤（2）去污剂有利于AgAb形成，洗液中加0.05% Tween-20（3）Ag、Ab反应时间、温度：一般 37℃、40～50分钟3.洗涤用 PH7.2-7.4PBS,规一化,每次浸泡1~2 分钟, 抛干,共洗涤3~4次4.酶促反应条件温度37℃时间10-20分pH 5.5底物量一致5.排除干扰：多设对照。

　ELISA试验应设哪些对照，为什么？ 阳性对照 同标本一样 颜色深；阴性对照 同标本一样 颜色浅or无色；酶结合物对照 加酶步加入 无色；底物对照 加底物步加入 无色；空白对照 只加终止液 无色。

　判断ELISA试验结果的方法。

　（一）肉眼判定与阳性、阴性对照颜色比较：1.若待检孔显色浅于阴性对照则判定为阴性；2.若待检孔显色深于或等于阳性对照孔则判定为阳性；3.若待检孔显色介于阴性对照孔和阳性对照孔之间则判定为弱阳性。（二）酶标光度仪检测A492值（吸光率）：比色法1.与阳性、阴性对照测定值比较2.P/N比值：大于2.0为阳性，小于2.0为阴性P: positive（待测吸光度值）N: negative

　免疫血清制备的主要程序。（一）动物的选择：1.常用动物：哺乳类较多：马、羊、猪、猴、兔豚鼠等；禽类：鸡。2.选择原则：免疫的Ag与动物的种类要求越远越好（即免疫原性好）；

　与免疫血清的量有关：所需量大，用马、羊、猴等大动物；所需量小，用兔、豚鼠等小动物

　动物的个体状态：雄性、适龄、健康、无感染；其它：根据实验的特殊要求。（二）抗原的条件：具有良好的抗原决定簇（表位）：易被LC识别而产生Ab；具有可靠的纯度；足够大的分子量及相对复杂的空间结构；注射量：严格掌握。宁可小，一般用25μg/kg动物；量大可出现免疫抑制

　佐剂概念、作用机理、福氏不完全/完全佐剂的组成。佐剂（adjuvant)：同Ag一起或预先注入机体，能增强机体对该Ag的免疫应答或改变免疫应答类型的物质。福氏不完全佐剂（FIA）：组成：羊毛脂＋石腊油，二者比例为4：1.福氏完全佐剂（FCA）：组成：羊毛脂＋石腊油＋卡介苗

　分离提纯免疫球蛋白有哪些方法，其原理是什么？1盐析法:在不同浓度的中性盐中蛋白质会脱水，降低带电电势，亲水性变为疏水性，分子间相互凝聚而沉淀（盐析作用）。不同蛋白质盐析所需中性盐的浓度不同，故可分离不同蛋白质。2离子交换层析法:原理利用不同的蛋白质在缓冲溶液中所带电荷不同，与某一载体上的具有相反电荷的离子基团进行吸附，然后进行解脱，达到纯化蛋白质目的。3凝胶过滤法:凝胶颗粒是网状结构，当分子大小不同的混合物通过凝胶柱时，分子大的先下来，分子小的嵌入凝胶颗粒的网状结构中后下来，从而将分子大小不同的物质分离开来，即为分子筛的作用。4亲和层析法:利用抗原抗体的结合具有特异性、可逆性，将纯化抗原先交联到载体（琼脂糖珠）上，制成亲和层析柱，当Ab（Ig）通过时，与抗原特异性结合在柱上，Ab中杂质流出。然后通过改变缓冲液 pH、离子强度，使Ab解脱下来。

　单克隆抗体概念 由一个B细胞克隆产生的识别单一抗原表位的同源抗体。

　杂交瘤技术制备单抗的原理及简要步骤 能产生抗体的小鼠B(浆)细胞与小鼠骨髓瘤细胞杂交能生成分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞。1.制备能产生单抗的杂交瘤细胞2.克隆化杂交瘤细胞3.筛选杂交瘤细胞 4.扩大培养单克隆杂交瘤细胞5.收集单抗并鉴定6.纯化单抗

　HAT培养基的作用 (次黄嘌呤、氨基蝶呤、胸腺嘧啶）：氨基蝶呤是抗代谢的药物，能阻断内源性合成DNA（合成DNA的主要途径）。选出杂交瘤细胞。

　人源单克隆抗体 概念：单克隆抗体为人IgG。制备目的：用于人。

　基因工程抗体、嵌合抗体概念，嵌合抗体优点 基因工程抗体：在基因水平上对编码抗体的基因进行切割、拼接或修饰，甚至人工合成，然后导入受体细胞内表达而产生的抗体（单克隆抗体）。嵌合抗体：用DNA 重组技术将鼠源单抗基因的可变区（V区）基因与产生人Ig的恒定区（C区）基因相连接，构成嵌合基因，导入受体细胞（骨髓瘤细胞），表达出嵌合抗体。a.免疫原性低，有利于用于人体b.在人体内半衰期较鼠单抗长c.在人体内生物学作用（如CDC、ADCC）较鼠单抗强d.与人/人杂交瘤比，体外传代更稳定

　人体免疫功能包括哪些组成部分一.非特异性免疫应答1.皮肤黏膜的机械阻挡作用及局部分泌的抑菌、杀菌物质2.吞噬细胞的吞噬作用3.NK(nature killer)细胞对病毒感染靶细胞的杀伤作用4.血液、体液中的抗菌分子：补体、溶菌酶。二.特异性免疫应答细胞免疫：由T LC主导完成，其效应物质是致敏TLc(CTL/Th1)体液免疫：由BLC主导完成，其效应物质是Ab

　实验室中检测人细胞免疫和体液免疫最常用哪些试验，这些试验的原理如何？正常值应为多少？ 一.T细胞的计数（T细胞表面标志的检测）（一）特异性抗原的检测T细胞表面有一些特异的CD抗原，根据这些不同的CD抗原可鉴定不同的T细胞群体1.免疫荧光法：用荧光素标记的单抗作为试剂染色淋巴细胞，计算出染上荧光的淋巴细胞百分率2.免疫细胞化学法。（二）T细胞特异性受体（E受体）的检测E花环形成试验 (Erythrocyte Rosette forming test)原理：T淋巴细胞表面含有绵羊红细胞（SRBC)受体（CD2)，当T淋巴细胞与绵羊红细胞相遇时，T细胞通过该受体吸附绵羊红细胞而形成花环。Et正常值60%~80%Ea正常值20%~30%二.T细胞功能的检测（一）淋巴细胞转化试验1.原理淋巴细胞在某些物质刺激下，细胞增殖、分化（如细胞变大、胞浆增多、出现空泡）DNA合成增加（核染色质疏松，核仁出现），转化成为淋巴母细胞。（1）形态学检测法正常值60%～80%。（2）同位素掺入法（ 3H-TdR掺入法）原理：T细胞受PHA刺激后，细胞进入增殖周期发生有丝分裂合成DNA。试验中当细胞进入S期时，在培养液中加入3H-胸腺嘧啶核苷（3H-TdR)，细胞摄入，合成DNA,据掺入细胞内的同位素量，可推测细胞增殖活跃程度，从而判断淋巴细胞转化的程度。（3）MTT比色法（二）相关的细胞因子的检测（三）淋巴细胞的细胞毒性检测1.形态学方法2.同位素法：常用51Cr释放试验原理：用51Cr标记靶细胞（一般为肿瘤细胞），将它与待测淋巴细胞（效应CTL细胞）一起培养，效应细胞破坏靶细胞， 51Cr释放出来，测定其51Cr数量，便可推知效应细胞的杀伤能力。特异溶解百分率大于50%为阳性。二、细胞免疫功能体内检测法（—） Ⅳ型超敏反应皮试原理： Ⅳ型超敏反应的本质是细胞免疫，所以Ⅳ型超敏反应如为阳性，可反映细胞免疫功能好。阳性（直径>0.5cm)：曾感染过结核菌，细胞免疫功能好。阴性(直径< 0.5cm) ：细胞免疫功能差或从未感染过结核菌。强阳性（直径>2.5cm)：表明现处于结核的活动期。三.B细胞数量的检测（一）B细胞表面识别抗原受体（BCR）（SmIg, Surface membrane Ig)的检测。正常值：15%~25%。（二）B细胞表面抗原的检测。B细胞表面特有的CD抗原有：CD19、CD20，用抗CD20的单抗（免疫荧光法、酶免疫组化法）检测外周血淋巴细胞，阳性细胞为B淋巴细胞，约占总淋巴细胞的10%~15%。四.B细胞功能的检测（一）血清中Ig的测定人的体液免疫功能正常（B 细胞功能正常），应反映在血清中有正常量的免疫球蛋白（二）血型抗体效价的测定反映体内IgM水平正常6月婴儿抗 A >1 ：8，或抗 B > 1 : 4; 1岁后抗A>1:16 ，或抗B > 1 ：8如3岁以上抗A或抗B效价仍 < 1 ：4，表示IgM缺乏，提示先天性体液免疫功能缺陷。（三）抗原刺激机体后抗体应答反应（体内试验）将抗原注射到体内，一段时间后检测相应抗体效价，如抗体效价低，说明机体体液免疫功能差如用三联伤寒菌苗0.25ml注射，每周1次，连续3次，抗H应为1 ：160，若低，表示体液免疫应答功能差。

　补体的定义、组成及性质 complement：补体是存在于人和动物血清中的一组具有酶活性的球蛋白，一般情况下处于未激活状态。补体的特性：稳定性差，各种理化因素都可使之失活：如酸、碱、紫外线照射、剧烈震荡等。组成：1.补体的固有成分：C1-C9,其中C1又包括C1q、C1r、C1s,共9种成分11种蛋白分子。其中C9的分子量最小、C3的含量最高；2.补体的调节蛋白：如C4调节蛋白、C1抑制物、S蛋白等；3.补体受体；如C1qR、C3aR等；

　CH50实验的原理、正常值及意义 原理：组成和功能完整的补体系统能使致敏羊红细胞发生溶血；羊红细胞的溶血程度与补体的活性成正比；CH50（U/ml）＝1/血清用量×稀释倍数。总补体活性参考范围：50－100U/ml。补体检测的临床意义：1.补体量↑:多见于急性炎症感染、组织损伤、癌肿；2.补体量↓：见于补体消耗↑：体内有Ag、Ab 反应，如SLE、RA等；补体合成↓：肝脏疾患；补体先天性缺乏：具有遗传性和家族史

　补体结合实验的原理、结果判断及评价 原理：补体可与任何一组AgAb复合物结合；一旦与某一复合物结合后，便不再与另一复合物结合。结果判断：不溶血为阳性，即待测物中有相应的Ab或Ag；溶血为阴性，即待测物中无相应的Ab或Ag。优点：该试验既可测Ag、又可测Ab；Ag既可以是颗粒性Ag、也可是可溶性Ag、甚至可以是块状物，因此检测Ag的范围广；可以用于病毒、立克次氏体、细菌等多种病原体的检测（实际上是测Ag）；比较敏感(0.05μg/ml)、特异；结果判断明显：通过有无溶血来观察，无需特殊仪器检测。缺点：参与反应的物质多，影响因素也多；（反应体系中有Ag、Ab、C、羊红细胞、溶血素）；在正式试验前需要找出几种物质间最恰当的比例，比较复杂。

　免疫复合物的含义及免疫复合物病的致病原因含义：immune complex,它主要指AgAb复合物及AgAbC复合物两种。中等大小的IC沉积在体内，通过激活补体、激活血小板而致病。

　免疫复合物检测使用的标准品、出现的问题及WHO推荐的检测方法 标准品是AHG—热聚合人IgG（不是IC）。IC检测的有关技术问题：到目前为止，所有检测IC 的试验，还没有另人满意的标准化措施;在体外制备的IC还很不稳定，因此用人工合成的复合物作为定量标准不适宜。WHO推荐的检测方法：C1q结合试验、胶固素试验、类风湿因子（RF）试验、Raji细胞试验

　AID的基本特征及常见的AID有哪些？ 诱因可有可无。有一定的遗传倾向。女性患者多见，发病率随年龄增长而增加。患者血清中可检出高效价的自身抗体和（或）自身致敏T淋巴细胞。一些自身抗体在自身免疫病中呈现交叉重叠现象:即在同一种自身免疫病患者体内可检测到多种自身抗体，而不同的自身免疫病也可存在同一种自身抗体。

　IgG、IgA、IgM升高，尤其IgG升高明显。病损局部可发现有淋巴细胞、浆细胞、嗜酸性粒细胞浸润及免疫复合物沉积。免疫抑制剂治疗可取得一定疗效。系统性红斑狼疮（systemic lupus erythematosus, SLE）Ⅲ型；类风湿性关节炎（rheumatoid arthritis，RA）Ⅲ型；自身免疫性溶血性贫血（autoimmune hemolytic anemia, AIHA）Ⅱ型；重症肌无力（myasthenia gravis, MG）Ⅱ型。

　ANA的定义及ANAs的组成 抗核抗体（antinuclear antibody, ANA)原指抗细胞核抗原成分的自身抗体的总称。广义地指抗细胞内所有抗原成分的自身抗体的总和。

　ANA所针对的靶抗原由细胞核扩展到整个细胞，包括细胞核、细胞浆、细胞骨架及细胞周期等。

　抗核抗体谱（antinuclear antibodies, ANAs）抗DNA抗体：抗dsDNA、抗ssDNA抗体抗组蛋白抗体（AHA)：抗H1、H2A、H2B、H3、H4等抗ENA抗体：抗Sm、抗核糖核蛋白（RNP）、抗SS-A、抗SS-B等抗非组蛋白抗体：抗Scl-70、抗Jo-1、抗Ku、抗增殖细胞核抗原（PCNA）、抗PL-7、抗PL-12、抗着丝点抗体等抗核仁抗体：抗PM-Scl、抗NOR-90、抗U3nRNA抗细胞其它成分抗体：抗高尔基体、抗中心体、抗线粒体、抗肌动蛋白、抗核层蛋白等

　各种AID检测时的代表性自身抗体有哪些？ 抗dsDNA抗体对SLE有较高特异性，70-90%活动性SLE患者该抗体阳性，是SLE的诊断标准之一。AHA在药物性狼疮患者中阳性率达90-100%，而SLE病人阳性率仅有20-35%，类风湿性关节炎病人为36%。抗Sm抗体 ：抗Sm抗体是SLE的特异性标志，疾病特异度达99%，为提高SLE的诊断准确率，可将抗Sm抗体和抗dsDNA抗体同时检测。抗SS-A、SS-B抗体 ：抗SS-A和抗SS-B抗体并存是干燥综合症的特异标志。

　核糖核蛋白（ribonucleoprotein，RNP），又称u1RNP。抗u1RNP抗体在混合性结缔组织病(MCTD)阳性率为95%以上，是MCTD的标志抗体。抗Scl-70是进行性全身性硬化症（PSS）的标志抗体，阳性率为50-64%。抗Jo-1抗体对肌炎和间质性肺纤维化有高度特异性，抗体的效价与疾病的活动性相关。原发性胆汁性肝硬化（PBC）时AMA阳性率可达90%以上。AMA是PBC的血清学指标。

　在原发性免疫缺陷病中哪一种发生最多？ 原发性体液免疫缺陷病（占原发性ID的50~70%），如婴儿性联丙球蛋白缺乏症。

　怀疑体液免疫缺陷应作哪些过筛试验和确诊试验？ 1.过筛试验（1）血清蛋白电泳 丙球定量（2）血型抗体效价测定（反映IgM水平）正常（3）血清抗链球菌溶血素抗体的测定（抗 O）的测定—反应IgG水平（4）骨髓检查2. 确诊试验（1）血清免疫球蛋白（G、M、A）测定（2）抗原刺激后抗体应答反应3）B细胞计数（4）T细胞亚群测定

　怀疑细胞免疫缺陷应作哪些过筛试验和确诊试验？ 过筛试验（1）淋巴细胞绝对值测定（2）迟发型超敏反应皮试（3）胸腺X线检查。确诊试验（1）淋巴结活检（2）T淋巴细胞计数（3）T细胞功能试验

　Ⅰ、Ⅳ型超敏反应皮试的原理1当变应原再次进入致敏者皮肤，与吸附在肥大细胞或/和嗜碱性粒细胞上的特异IgE高变区结合，导致肥大细胞或嗜碱性粒细胞脱颗粒，释放生物活性介质：如组织胺、白三烯、激肽等。在20－30分钟内局部皮肤出现红晕、红斑、风团以及搔痒感，数小时后消失。出现此现象者判断为皮试阳性，即对该变应原过敏;未出现红晕、红斑、风团者为阴性，即对该变应原不过敏。4用皮内注射、皮肤斑贴等方法使变应原进入已致敏机体，体内致敏的T细胞CD4+Th1再次遇到相应抗原后，释放出大量细胞因子，如IL-2、IFN-γ、TNF、IL-3、GM-CSF,（1）活化巨噬细胞及NK，增强吞噬细胞作用；（2）吸引WBC到达Ag所在部位，促进吞噬；（3）促进T细胞增生和分泌细胞因子，加重局部炎症反应，最后造成局部以单核细胞和淋巴细胞浸润为主的炎症反应。

　比较Ⅰ、Ⅳ型超敏反应皮试(抗原、时间、结果、意义） 抗原：体液免疫 细胞免疫；时间：15-25min 48-72h；结果：风团和红晕反应，红肿、硬结等局部炎症反应；意义：寻找变应原

　、预防药物或疫苗过敏，寻找变应原、评价机体细胞免疫功能状态、用于传染病的诊断。

　掌握HLA-I、II类分子的结构、分布及意义。

　HLA-I类分子由一条α链和一条β链组成，α链的N端胞外区分为α1、α2、α3三个结构区，其中α1、α2构成抗原结合槽，与处理后的抗原肽结合形成MHC-抗原肽复合体。HLA-I类分子分布在所有有核细胞膜上。功能：识别和提呈内源性抗原肽；对CTL的识别起限制性作用。HLA-II类分子由一条α链和一条β链组成，两条肽链的胞外区分别有α1、α2和β1、β2两个功能区，由α1与β1共同形成抗原结合槽。分布：抗原提呈细胞(如B细胞、巨噬细胞、树突状细胞)及活化的T细胞等。功能：识别和提呈外源性抗原肽；对Th的识别起限制性作用。

　移植排斥反应的类型及产生的原因和避免方法。

　原因：供、受体间HLA Ⅰ类、Ⅱ类抗原的差异，差异越大排斥越强。DR — 最重要。1.超急性排斥反应：预存抗体产生的原因：多次输血，血液透析，多次妊娠，再次移植。个别原因不明，可能与曾感染某些病毒细菌有关，产生同种异型抗体。避免方法：移植前对受体血清与供体细胞进行细胞毒试验（CDC试验，complement dependent cytotoxicity），检测受者血清中是否预存有抗供者细胞的抗体。2.加速性排斥反应产生机理：同超级性，但抗体效价及亲和性要低些。极少数也可能由致敏淋巴细胞引起。避免方法：CDC试验3.急性排斥反应机理：供、受者HLA Ag型别不完全一致造成的。早期以细胞免疫为主、晚期体液免疫为主避免：尽可能选HLA Ag型别一致的供体4.慢性排斥反应机理：供、受者HLA Ag型别不完全一致造成的。早期以细胞免疫为主、晚期体液免疫为主避免：尽可能选HLA Ag型别一致的供体

　移植物抗宿主反应的概念及产生原因。

　移植物中免疫活性细胞攻击宿主。（1）宿主免疫活性细胞处于反应无能状态（2）移植物中含有大量的免疫活性细胞

　移植前选择供体应做哪些检测？（一交叉配合试验1.测受体血清中有无抗供体细胞的抗体（1）微量细胞毒试验（complement dependent cytotoxicity,CDC 试验)2.混合淋巴细胞培养（二HLA型别检测1.血清学方法（Serologically defined antigen, SD抗原）（1）检测位点：A、B、C、DR、DQ（2）检测细胞：检测A、B、C位点 —用总淋巴细胞检测 DR、DQ 位点— 用B淋 巴细胞血清学与细胞学鉴定HLA抗原的基因位点是哪些，检测时应采用什么细胞？ 细胞分型法（lymphocyte defined antigen, LD抗原）检测位点：DP待测细胞：BLc方法：淋巴细胞混合培养试验（mixed lymphocyte culture, MLC)分双向与单向混合培养两种方法

　举例解释CDC试验。

　移植前选择供体的检测。微量细胞毒试验（complement dependent cytotoxicity,方法：受体血清+供体Lc＋补体 观察细胞死亡情况，大于10%应放弃此供体

　移植后监测排斥反应应做哪些检测？ 1.3H-TdR四小时掺入法（2）外周血T细胞计数（3）补体C3测定

　免疫学检测质控的内在品质和外在因素各有哪些？如何进行衡量？ 内在品质：精密度、准确度、敏感性、特异性等。外在因素：试剂、器材、参考品、操作人员等。精密度（precision）：用某种方法对同一标本反复测定，所得结果之间的差异大小，即彼此之间的符合程度。用标准差（SD）和变异系数（CV）来衡量其大小。包括批内精密度和批间精密度。准确度（accuracy）：测定值和真实值之间的符合程度。敏感性（sensitivity）：测定方法检测极低浓度物质的能力；标本的真实状态为阳性，用该方法检测能得到阳性结果。衡量方法：①将参考品作系列稀释，观察该方法所能测定的最低含量；②检测临床已确诊的病例。特异性（specificity）：标本真实状态为阴性，用该方法测定能得到阴性结果；无交叉反应。衡量方法：①检测正常人群或已知的无关病例；②已知的阳性标本，加入免疫阻断剂后是否得到阴性结果。