稽留流产组织的染色体检测研究分析
时间：2021-02-03 18:07:47 来源：达达文档网 本文已影响 人 
赵艳辉
【摘要】 目的 研究分析稽留流产组织的染色体检测。方法 60例稽留流产孕妇， 均接受流产胎儿组织及绒毛组织染色体拷贝数变异测序（CNV-sep）检测， 分析检测结果， 依据结果分为染色体正常组和染色体异常组， 对两组孕妇年龄、胎儿性别进行统计比较。结果 60例孕妇稽留流产组织（流产绒毛标本55例， 流产胎儿标本5例）中， CNV-sep技术检测染色体异常31例， 异常检出率为51.7%。流产绒毛标本55例中， 获取CNV-sep技术检测结果55例， 检测成功率为100.0%， 染色体正常25例， 占45.5%， 其中染色体核型46， XY 11例（44.0%）， 46， XX 14例（56.0%）;染色体异常30例， 占54.5%， 其中染色体单体异常3例（10.0%）， 均为性染色体单体。染色体三体型异常19例（63.3%）， 包括13-三体2例（10.5%）， 16-三体6例（31.6%）， 18-三体4例（21.1%）， 21-三体1例（5.3%）， 22-三体6例（31.6%）。性染色体三体型2例（6.7%）， 包括XXY 1例（50.0%）， XXX 1例（50.0%）。染色体多倍体6例（20.0%）， 包括三倍体5例（83.3%）， 四倍体1例（16.7%）。流产胎儿标本5例中， 获取CNV-sep技术检测结果5例， 检测成功率为100.0%， 染色体正常4例， 占80.0%， 其中染色体核型46， XY 2例（50.0%）， 46， XX 2例（50.0%）;染色体异常1例， 占20.0%， 为18-三体。染色体正常组孕妇的年龄（32.6±5.0）岁和染色体异常组的（31.7±5.9）岁比较， 差异无统计学意义（P>0.05）。两组胎儿性别比较， 差异无统计学意义（P>0.05）。结论 稽留流产组织的染色体检测能够将有效依据提供给临床了解流产原因， 进而指导下一次受孕。
【关键词】 稽留流产;流产胎儿组织;流产绒毛组织;染色体CNV-sep检测
DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2020.24.089
自然流产在妇产科较为常见， 10%～15%的妊娠会自然流产[1]， 环境因素、胎盘因素、胚胎因素、母体因素等很多因素均对其发生造成了影响， 其中主要影响因素为胚胎染色体异常[2]。稽留流产属于一種特殊的自然流产， 又称过期流产， 指没有及时排出宫内胚胎或胎儿， 目前， 临床还没有明确其病因[3]。检测流产组织染色体， 对胚胎停育、流产原因进行分析一方面能够将理论依据提供给临床咨询， 另一方面还能够指导孕妇再次妊娠[4]。现阶段， 在医学诊断的各个领域， CNV-sep技术均已经得到了广泛应用[5]。本文研究分析了稽留流产组织的染色体检测。
1 资料与方法
1. 1 一般资料 回顾性分析2017年1月～2020年1月本院收治的60例稽留流产孕妇的临床资料， 年龄26～41岁， 平均年龄（33.5±5.4）岁;停经时间8～14周， 平均停经时间（11.2±2.4）周。
1. 2 纳入及排除标准 纳入标准：均接受清宫术治疗;均符合稽留流产的诊断标准[6];均知情同意。排除标准：缺乏齐全的病历资料;缺乏良好的依从性;缺乏清晰的意识。
1. 3 方法
1. 3. 1 样本制备 术中严格无菌操作， 从宫腔中取胎儿腓肠肌组织或绒毛组织， 放置在含肝素生理盐水的无菌容器中， 显微镜下取5 mg左右的组织， 用无菌剪刀剪碎， 加入5 ml 的0.075 mol/L氯化钾溶液， 在37℃的温度下低渗20 min， 用固定液（甲醇：冰乙酸）预固定， 离心， 弃上清， 连续固定2次， 10 min/次， 再次弃上清， 加入1 ml醋酸， 消化1 min， 最后用3 ml甲醇终止消化。
1. 3. 2 CNV-sep检测 应用TaqMan探针对流产胎儿组织及绒毛组织进行检测， 将黄豆大小流产组织取出， 在微型离心管（EP管）中放置， 密闭保存。不冷冻， 在4℃的温度下保存、运输， 2 d内向实验室输送处理， 步骤为组织和DNA-EZ-GALO法DNA建库-Hiseq 2500测序-RUPA比对法生物信息学分析。
1. 4 观察指标及判定标准 随机计数流产胎儿组织及绒毛组织细胞100个及以上， 正常样本的标准为正常细胞占总数的90%以上， 异常样本的标准为异常细胞占总数的60%以上。在无法判断的情况下将计数扩大。依据结果将孕妇分为染色体正常组和染色体异常组， 比较两组孕妇年龄、胎儿性别。
1. 5 统计学方法 采用SPSS21.0统计学软件处理数据。计量资料以均数±标准差（ x-±s）表示， 采用t检验;计数资料以率（%）表示， 采用χ2检验。P<0.05表示差异有统计学意义。
2 结果
2. 1 60例孕妇稽留流产组织CNV-sep技术检测结果分析 60例孕妇稽留流产组织（流产绒毛标本55例， 流产胎儿标本5例）中， CNV-sep技术检测染色体异常31例， 异常检出率为51.7%。流产绒毛标本55例中， 获取CNV-sep技术检测结果55例， 检测成功率为100.0%。染色体正常25例， 占45.5%， 其中染色体核型46， XY 11例（44.0%）;46， XX 14例（56.0%）。染色体异常30例， 占54.5%， 其中染色体单体异常3例（10.0%）， 均为性染色体单体。染色体三体型异常19例（63.3%）， 包括13-三体2例（10.5%）， 16-三体6例（31.6%）， 18-三体4例（21.1%）， 21-三体1例（5.3%）， 22-三体6例（31.6%）。性染色体三体型2例（6.7%）， 包括XXY 1例（50.0%）， XXX 1例（50.0%）。染色体多倍体6例（20.0%）， 包括三倍体5例（83.3%）， 四倍体1例（16.7%）。流产胎儿标本5例中， 获取CNV-sep技术检测结果5例， 检测成功率为100.0%， 染色体正常4例， 占80.0%， 其中染色体核型46， XY 2例（50.0%）， 46， XX 2例（50.0%）;染色体异常1例， 占20.0%， 为18-三体。
2. 2 两组孕妇年龄、胎儿性别比较 染色体正常组孕妇年龄（32.6±5.0）岁和染色体异常组的（31.7±5.9）岁比较， 差异无统计学意义（P>0.05）。两组胎儿性别比较， 差异无统计学意义（P>0.05）。见表1。
3 讨论
近年来， 稽留流产发生率在高龄妊娠、环境因素等作用下日益提升， 主要原因为流产胎儿胚胎染色体异常， 达到了50%～60%的发生率[7]。CNV-seq即通过低倍全基因组测序检测拷贝数变异（CNV）的技术， 2009年由Xie等开发提出[8]， 可以检测全基因组水平上的大片段CNV。贝瑞和康采用双盲实验设计， 对染色体结构异常的样本进行检测， 滑窗大小为20 kb的情况下， CNV-seq和高密度SNP-array对于已知致病CNVs都能达到100%的检出。与中等密度SNP-array相比， CNV-seq表现更优。鉴于CNV-seq价格较低， CNV-seq可以替代微阵列芯片用于大片段CNV检测。临床分染色体异常为染色体结构异常、染色体数目异常两种类型， 而自然流产中染色体异常中染色体数目异常占极大比例， 其中最为常见的为非整倍体数目异常。染色体数目异常患者中， 主要为染色体三体， 单体较为少见[9]。同时， 在流产绒毛染色体检查中， 三倍体也较为常见， 这种染色体的数目异常可能从卵母细胞或精母细胞减数分裂异常中来源， 也可能从双亲之一方配子形成过程中有丝分裂异常中来源， 还可能从新的突变中来源[10]。相关医学研究表明[11]， 胚胎稽留流产的主要诱发因素为染色体异常， 因此检测流产胚胎的染色体一方面能够帮助临床对本次流产原因进行了解， 另一方面还能够有效指导下一次受孕。
本研究结果表明， 60例孕妇稽留流产组织（流产绒毛标本55例， 流产胎儿标本5例）中， CNV-sep技术检测染色体异常31例， 异常检出率为51.7%。流产绒毛标本55例中， 获取CNV-sep技术检测结果55例， 检测成功率为100.0%， 染色体正常25例， 占45.5%， 其中染色体核型46， XY 11例（44.0%）， 46， XX 14例（56.0%）;染色体异常30例， 占54.5%， 其中染色体单体异常3例（10.0%）， 均为性染色体单体。染色体三体型异常19例（63.3%）， 包括13-三体2例（10.5%）， 16-三体6例（31.6%）， 18-三体4例（21.1%）， 21-三体1例（5.3%）， 22-三体6例（31.6%）。性染色体三体型2例（6.7%）， 包括XXY 1例（50.0%）， XXX 1例（50.0%）。染色体多倍体6例（20.0%）， 包括三倍体5例（83.3%）， 四倍体1例（16.7%）。流产胎儿标本5例中， 获取CNV-sep技术检测结果5例， 检测成功率为100.0%， 染色体正常4例， 占80.0%， 其中染色体核型46， XY 2例（50.0%）， 46， XX 2例（50.0%）;染色体异常1例， 占20.0%， 为18-三体。和上述观点一致， 发生这一现象的原因为染色体在妊娠初期受精卵卵裂时或双亲之一的配子形成时有不分离现象发生， 进而增多或减少了该条染色体， 从而造成三体型及单体型[12]。本研究结果还表明， 染色体正常组孕妇的年龄（32.6±5.0）岁和染色体异常组的（31.7±5.9）岁比较， 差异无统计学意义（P>0.05）。两组胎儿性别比较， 差异无统计学意义（P>0.05）。和上述研究结果一致， 说明孕妇年龄、胎儿性别不受到流产组织染色体异常的直接影响， 发生这一现象的原因可能为具有较少的患者数量， 需要将样本加大进行进一步统计。
综上所述， 稽留流产组织的染色体检测能够将有效依据提供给临床了解流产原因， 进而指导下一次受孕， 值得在临床推广应用。
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[收稿日期：2020-04-02]
