【丹参酮对实验性心肌肥厚大鼠凋亡相关因子表达的影响】 大鼠骨折炎性因子水平变化
时间：2019-01-15 04:33:35 来源：达达文档网 本文已影响 人 
【摘要】 目的 探讨丹参酮对异丙肾上腺素诱导的心肌细胞肥大的影响。方法 采用皮下注射异丙肾上腺素造成心肌肥厚大鼠模型，通过免疫组织化学方法观察丹参酮对肥大心肌细胞凋亡相关因子Fas、Bcl2�表达的影响。结果 异丙肾上腺素组大鼠心肌肥厚，Fas、Bcl2�基因表达增加(P2�基因表达增加(P2�基因表达有关。【关键词】丹参酮；心肌肥厚；细胞凋亡相关基因
Effects of tanshinone on apoptosis related gene expression in experimental cardiac hypertrophy in rats
YANG Chun-guang,SUN Chang-bin,QU Peng,et al.Medical College of Dalian University,Dalian 116622,China
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【Abstract】 Objective To study the effects and mechanisms of tanshinone on isoproterenol induced cardiac hypertrophy in rats.Methods Cardiac hypertrophy rat model was induced by subcutaneous injection of isoprenaline.The myocardial expression of apoptosis related genes,Fas and Bcl2� were detected by immuno-histochemical technique in cardiac hypertrophy rats treated by tanshinone.Results The expression of apoptosis related genes,Fas and Bcl2� were increased in cardiac hypertrophy rats induced by isoprenaline(P2� was increased in rats treated by tanshinone(P2� expression caused by tanshinone.
【Key words】Tanshinone;Cardiac hypertrophy;Apoptosis related gene
心力衰竭发生发展的一个重要病理过程就是心肌肥厚，心肌肥厚是由一系列复杂的分子和细胞机制导致心肌结构、功能的变化，其中就包括心肌细胞凋亡的过程[1]。丹参的脂溶性成分丹参酮，常被用于冠心病的治疗。近年对丹参酮的研究发现，它可以显著的逆转自发性高血压大鼠和异丙肾上腺素(isoprenaline,Iso)诱导的心肌细胞肥大[2]。但其分子学机制尚未完全清楚。本实验利用免疫组化技术观察丹参酮对异丙肾上腺素诱导的心肌细胞肥大的影响，探讨丹参酮预防及逆转心肌肥大的作用机制。�
1 材料�
1．1 动物 SD雄性大鼠20只，平均体质量(200±50)g。由大连大学实验动物中心提供。�
1．2 试剂与仪器 丹参酮，上海第一生物制药厂生产(批号:071106)；盐酸异丙肾上腺素注射液，上海禾丰制药有限公司(批号:071012)；兔抗多克隆抗体及免疫组化试剂盒均购自北京中山生物技术有限公司。切片机(KD1508．浙江金华料迪仪器设备有限公司)；显微镜(CX21．日本OLYMPUS)；照相系统(80I.NIKON ECLIPSE)；Image Pro Plus 4．5图像分析系统(美国Media Cybernetics 公司)。�
2 实验方法�
2．1 动物分组和模型制备 大鼠随机分成NS对照组(sc等剂量NS)、Iso组(10 mg/kg)、丹参酮给药组(10 mg/kg，sc Iso后半小时腹腔注射)等3组，每组动物6只，连续给药3 d。第3天给药后4 h迅速摘取心脏，用生理盐水清洗,吸干后称取心脏湿重，然后切取左心室称重，计算左心重指数。左心重指数=左心室重量/心重(g/g)。�
2．2 心肌组织形态学观察(HE染色)左心室在10%甲醛中固定，逐级酒精脱水，二甲苯透明、浸蜡，石蜡包埋，常规切片4 μm，HE染色。观察组织切片的病理学改变。�
2．3 免疫组化检测心肌组织中Fas、Bcl2�表达 左心室心肌组织石蜡切片制备同上，常规脱蜡至水，3%H2 O2去离子水孵育，室温10 min 后，PBS洗涤；10%山羊血清封闭，室温孵育10 min；分别加1:50稀释的兔抗Bcl2�、Fas多克隆抗体，37℃孵育3 h，PBS冲洗3 min×3次；加生物素标记二抗工作液，37℃孵育15 min，PBS 冲洗3 min×3次；滴加辣根酶标记链霉卵白素工作液，37℃孵育15 min，PBS冲洗3 min×3次；DAB显色，自来水充分冲洗，脱水、透明、封片。�
每组测定5张切片，每张切片取6个视野，以视野数为单位，每组共30个视野(n=30)，切片在显微镜400倍下用Image Pro Plus 4．5图象分析系统测量平均光密度值(average optical density，AOD)，然后计算均值作为此组的形态代表值，以细胞膜、细胞浆呈棕褐色为Bcl2�和Fas蛋白阳性表达。�
2．4 统计学方法 采用SPSS 10．0软件进行统计学分析各项数据，均数间比较用单因素方差分析。所有资料的各项数据均以均值±标准差(x±s)表示。�
3 结果�
3．1 左心重指数 Iso组心重指数明显增加，而丹参酮给药组与Iso组比较心重指数降低。见表1。�
3．2 心肌组织形态学观察 光镜下对照组心肌纤维呈圆柱状，肌纤维膜，纵横纹，心肌纤维平行排列；Iso组心肌纤维排列相当紊乱，纤维出现断裂，无法看到横纹；丹参酮给药组心肌纤维排列整齐，横纹清晰，有分叉结构，细胞膜有轻度损伤。�
3．3 免疫组织化学观察 与Iso组比较，丹参酮给药组左心室心肌组织Fas表达降低(P2� 表达增加(P2+含量，阻断了心肌肥厚信号向核内传导，抑制心肌细胞原癌基因c-fos的表达，最终抑制心肌肥厚的的发生[3]。�
本实验采用异丙肾上腺素诱导的心肌肥厚大鼠模型，观察到Iso组大鼠心肌组织中凋亡相关基因Fas、Bcl2�表达均增高，这与之前的研究基本一致[4]。细胞凋亡是在基因调控下的一个严密完整的程序过程，包括一系列环节及各自相关的抑制和促进因子。Fas是一种属于肿瘤坏死因子受体超家族的Ⅰ型跨膜糖蛋白，在心肌细胞有丰富的表达，Fas与其配体Fas-L结合可诱导细胞凋亡的发生，是介导细胞凋亡的主要形式。Bcl2�家族也是一类参与凋亡调节的重要因子，Bcl2�是其中的凋亡抑制因子，Bcl2�高表达可抑制凋亡而不影响细胞有丝分裂，而另一个家庭成员Bax则为促凋亡因子，其过度表达将加速由IL3介导的细胞凋亡。一般情况下,当促细胞凋亡途径被激活时，抑制细胞凋亡基因的表达量也会增加。但本实验发现丹参酮给药组心肌组织中凋亡相关基因Fas表达降低，Bcl2�基因表达升高。
本实验结果提示，丹参酮可能是通过抑制凋亡相关基因Fas表达，增加Bcl2�的表达来抑制异丙肾上腺素诱导的大鼠心肌肥厚。细胞凋亡的信号传导途径很复杂，丹参酮对凋亡相关基因的表达是否具有直接作用，有待进一步观察及深入研究。�
参考文献
［1］ Yang L,Zou X,Liang Q,et al.Sodium tanshinone IIA sulfonate depresses angiotensin II-induced cardiomyocyte hypertrophy through MEK/ERK pathway.Exp Mol Med,2007,39(1):65-73.�
［2］ 王守涛,史国兵,周娟,等.丹参酮ⅡA静脉乳剂对异丙肾上腺素致大鼠急性心肌缺血损伤的保护作用.实用药物与临床,2007,10(4):205-207.�
［3］ Takahashi K,Ouyang X,Komatsu K,et al.Sodium tanshinone IIA sulfonate derived from Danshen(Salvia miltiorrhiza)attenuates hypertrophy induced by angiotensin II in cultured neonatal rat cardiac cells.Biochem Pharmacol.2002,64(4):745-749.�
［4］ 曹立珍,毛一卿,谭焕然.异丙肾上腺素对大鼠心肌细胞凋亡相关基因表达的影响.药学学报,2000,35(11):801-805.�
