延边地区汉族和韩国人精神分裂症患者脯氨酸脱氢酶－Ｔ１９４５Ｃ基因的多态性|谷氨酸脱氢酶
时间：2019-01-18 04:35:03 来源：达达文档网 本文已影响 人 
【摘 要】 目的：探讨延边汉族和韩国人精神分裂症脯氨酸脱氢酶（PRODH）-1945(T/C) 基因多态性患者的相关性。方法： 采用Amp-RFLP方法对265例汉族和韩国人精神分裂症患者和192例正常人群的PRODH-1945(T/C) 基因的相关性进行研究。结果：PRODH-1945(T/C) 基因基因型频率和等位基因频率，在汉族患者和正常人群之间、韩国人患者和正常人群之间均无统计学差异；但不管是患者组还是正常人组，汉族和韩国人之间PRODH-1945(T/C) 基因基因型频率(χ2=6.19,P=0.045,χ2=6.45,P=0.04)和等位基因频率差异均有显著性（χ2=5.46,P=0.02,χ2=5.75,P=0.02），如汉族M等位基因频率均低于韩国人（患者：69.3%/78.4%，正常人：74.5%/84.4%）。 结论：延边地区汉族和韩国人之间正常人群和精神分裂症患者的PRODH-1945(T/C) 基因的变异，可能与种族差异有一定的相关性。�
【关键词】 精神分裂症；PRODH；基因多态性�
中图分类号：R749.3、Q987.1 文献标识码：A 文章编号：1000-6729(2007)04-00216-03
精神分裂症多起病于青壮年，人群中的发病率为0.5%―1%。研究表明遗传因素在疾病的发生、发展中有重要作用［1］。精神分裂症的候选基因研究也很活跃，比较有意义的是5-HTa受体和多巴胺D�3受体基因多态性，7-尼古丁受体基因部位、22DS(Deletion Syndrome)――22q11部位、三碱基反复扩增 (trinucleotide repeat expansion) 基因等。22 q11.2部位缺损是精神分裂症的高度危险因素［2］。 缺PRODH基因的基因敲除小鼠表现为学习和对神经精神药物反应性下降的现象［2］。PRODH基因其启动子多态性可能是精神分裂症病理机制之一［4］。Liu［5］等报道，位于22q11部位的PRODH基因在美国籍南非人精神分裂症患者中呈现关联性，其中PRODH-1945(T/C) 基因多态性最有意义。另外一项中国精神分裂症患者PRODH 的基因多态性研究表明，在探索的PRODH6个基因中 PRODH-1945T-C/PRODH-1852G-A呈现最有意义［6］。�
本研究采用RFLP方法对265例延边汉族和韩国人精神分裂症患者和192例在职于延边脑科医院和延边社会精神医院的工作人员的PRODH-1945(T/C) 基因型和精神分裂症的相关性进行研究，探索在精神分裂症中神经传导物质的机能异常与文化和民族的关系，为后续的分子遗传学研究提供基础资料。�
1 对象和方法�
1.1对象 患者组：选择2002年1-9月住院于延边脑科医院和延边社会精神医院，据美国精神疾病诊断标准第四版（DSM-IV）［10］诊断为精神分裂症的汉族患者96例，男66例，女30例；平均年龄38.5±13.8岁，平均病程11.5±11.6年，其中妄想型42例，青春型20例，紧张型16例，单纯型9例，未定型6例，其他3例。选择2001年9月至2002年9月住院于韩国庆熙大学附属医院精神科，据DSM-IV诊断为精神分裂症的韩国患者169例，男99例，女70例； 平均年龄40.5±11.6岁，平均病程11.8±11.3年，其中妄想型69例，青春型36例，紧张型27例，单纯型21例，未定型11例，其他5例。两病例组的病程、性别、年龄 差异均无统计学意义（P>0.05）。健康对照组： 取在职于延边脑科医院和延边社会精神医院的工作人员汉族96例（男51例，女45例，平均年龄41±11岁），取韩国健康诊断中心的健康人自愿者96例，男51例，女45例，平均年龄41.0±11.4岁。两健康对照组间年龄、性别差异均无统计学意义。全部457人均上代无族间通婚史, 无精神病家族史，亦无亲缘关系。�
1.2方法 1.2.1 DNA抽提 抽取研究对象外周静脉血3ml，置于EDTA试管抗凝之后保存于-20℃冰箱。采用DNA抽取试剂盒（Roche, Manheim, Germany）来抽取DNA，保存于-20℃冰箱，作为PCR模板。�
1.2.2 DNA扩增 在PRODH-1945(T/C) 基因序列当中，设计出可被Pυu Ⅱ内切酶所切的PCR引物，其引物序列是：Pυu Ⅱ 引物1：5"- TGCTGGAGGCTAAGGGTGT-3 "；Pυu Ⅱ 引物2：5"-TAGGCATGTGTGACCAGATCAG-3"。PCR检测：经反复预试验，在DNA 0.1μg, 10xPCR 缓冲液（pH8.3, 100mM Tris-HCl, 500mM KCl, 15mM MgCl2) 3μl,加25mM dNTP 1μl, 10pmol 引物1μl,Tαq DNA聚合酶(Biotool, USA) 0.2μl (5U/μl), 加无菌双蒸水22.8 μl至最终体积为30 μl。在德国产Master cycler gradient PCR仪(Eppendorf, Germany)进行扩增。循环参数：94℃变性30s，60℃退火30s，72 ℃延伸30s，35个循环，最后72℃延伸5min。经PCR扩增后产生的DNA长度为326bp。 在含溴乙锭的1.5%琼脂糖凝胶上进行电泳,电泳结束后在紫外灯下确认其大小为326bp。�
1.2.3 DNA 酶切分析 采用 Pυu Ⅱ来酶切。在扩增的DNA 产物5ul ，加2U Pυu Ⅱ酶 (New England Biolabs, USA)，酶缓冲液 2 μl ， 加二次蒸馏水12.8 μl至最终体积为20 μl。在37℃水浴条件下酶切4小时，酶切后产物用含溴乙锭的2.5%琼脂糖凝胶上进行电泳，电泳结束后在紫外灯下观察 DNA条带的位置，分析电泳结果。对病人组和对照组DNA样本进行重复扩增和酶切分析,核对基因型结果。�
经PCR扩增后产生长度为326bp产物。采用 Pυu Ⅱ 酶切处理后，不能被酶切，仍保持326bp的样本定为等位基因M纯合子。可被完全酶切成为233bp和93bp两种片段的样本定为等位基因m纯合子，仅有一半326bp片段被酶切，酶切后同时存在326bp、233bp和93bp的样本定为Mm杂合子。�
1.3 统计方法 计算基因型频率、等位基因频率，用Hardy-Weinberg遗传平衡定律预测值和卡方检验进行显著性分析。 �
2 结果�
2.1 PRODH-1945（T/C）基因型频率、等位基因检测结果 表1显示M等位基因频率汉族患者为69.3%，韩国人患者为78.4%，汉族正常人群为74.5%。韩国人正常人群为84.4%。在所有的组别中M等位基因频率均有高于m的倾向，但在汉族96例精神分裂症患者和96例对照组之间PRODH基因检验有关基因型频率（χ2=2.21,P=0.33）和等位基因频率（χ2=1.29,P=0.26）差异无统计学意义；在韩国人169例精神分裂症患者和96例对照组之间PRODH基因检测有关基因型频率（χ2=3.50,P=0.17）和等位基因频率（χ2=2.79,P=0.09）差异也无统计学意义。�
2.2 两组精神分裂症患者间及两组正常人对照组间PRODH基因检测结果比较 表1显示两组患者间基因型频率（χ�2=6.19,P=0.045）和等位基因频率（χ2=5.46,P=0.02）差异均有统计学意义。两组正常人对照组之间PRODH基因检测有关基因型频率（χ2=6.45,P=0.04）和等位基因频率（χ2=5.75,P=0.02）差异也有统计学显著性。�
3 讨论�
精神分裂症在诊断上缺乏生物学指标，采用逆向遗传方法研究这类生化代谢异常、原因不明疾病的病因及寻找生物学诊断指标是必要的。本文发现汉族和韩国人种族之间PRODH-1945(T/C) 基因的变异有差异，不管是患者组还是正常人群组之间差异均有统计学显著性，而汉族患者与正常人、韩国患者与正常人间差异无统计学显著性。表明PRODH-1945(T/C) 基因的变异在精神分裂症患者和正常人之间无功能性意义，只与种族差异有相关性。�
精神分裂症的精神病理也随着文化和民族的不同而不同，人种的头发、皮肤颜色不同基因多态性也存在一定的差异，其原因是种族与环境文化的差异［7］。 在本次研究中汉族和韩国人两个民族之间PRODH-1945(T/C) 基因多态性也呈现出这样的差异。�
与药物代谢有关的酶和神经递质活性也随着遗传因素不同而不同，同一个民族中个体间也都存在不同的活性度差异，所以每个患者所出现的反应的差异由药物代谢酶和受体遗传子基因多态性而决定［8］。大部分抗精神病药物与数个神经递质受体结合，开始对神经细胞产生作用，最终通过调节基因表达而产生神经细胞可塑性的变化［9］。若有关药物代谢的酶的活性度有所差异，神经细胞可塑性也会出现相应的不同变化［9］，最终在药物治疗反应里也会出现相应的不同结果。今后的研究应该用多个民族种族之间的患者血液样本来进行更多的参与精神分裂症病理机制的候选基因的多态性比较，进一步探索多个候选基因在各民族之间的差异，为精神分裂症患者临床用药剂量提供基础参考资料。
本文中所涉及到的图表、注解、公式等内容请以PDF格式阅读原文。
本文为全文原貌 未安装PDF浏览器用户请先下载安装 原版全文
