白花丹的功效与作用 [RP-HPLC-ELSD法测定野生白花丹药材1~12月份根、茎、叶中β-谷甾醇的含量]
时间：2019-01-10 04:24:55 来源：达达文档网 本文已影响 人 
摘要：目的：测定野生白花丹药材1~12月份根、茎、叶中β-谷甾醇的含量。方法：采用HPLC-ELSD法测定白花丹中β-谷甾醇的含量。色谱条件为：流动相为纯甲醇；色谱柱为迪马C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流速为1.0 mL/min；柱温25 ℃；蒸发光散射检测器检测参数为漂移管温度65 ℃，载气（N2）流速为2.5 L/min。结果：白花丹叶中β-谷甾醇的含量最高，其次是茎，根中含量最少；3、5、7、8月份采收的药材中含量最高，11、12月最低。结论：以β-谷甾醇为主要成分指标时最佳入药部位为叶，最佳采收期在3、5、7、8月份。
关键词：野生白花丹；β-谷甾醇；含量测定；RP-HPLC-ELSD
中图分类号：R284文献标识码：B
文章编号：1007-2349（2012）02-0055-02
白花丹是双子叶植物蓝雪科植物白雪花（Plumbago zeylanica L.）的全草［1］。为多民族医常用药材，民间应用广泛，具有散瘀消肿、祛风止痛等功效［1］。收载于1996年版《广西中药材标准》第二册和1998年版国家卫生部部颁维药标准。文献资料及本课题组前期的研究表明，白花丹具有抗肿瘤、抗炎、抗肝损伤等药理作用［2~8］。目前国内外日益重视白花丹药材的应用和开发，除有效成分白花丹醌外，对其有效成分β-谷甾醇的研究报道较少。本实验拟对野生白花丹药材1~12月份的根、茎、叶中的β-谷甾醇含量进行测定，以期为白花丹野生变家种提供有用的实验数据。
1实验材料
1.1仪器Waters 2695系列高效液相色谱仪（Waters公司），Empower色谱工作站，浙江大学N2000色谱工作站，Sedex-75型蒸发光散射检测器（奥泰公司）；色谱柱为迪马C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）。RE-52A型旋转蒸发器。METTLER AE 240双量程分析天平。
1.2试药β-谷甾醇对照品（成都市药检所，供含量测定用）；甲醇为色谱纯；所用提取试剂均为分析纯。
1.3药材实验所用药材样品采自于白花丹最适产地云南西双版纳（中国医学科学院药用植物研究所南药园），经西南民族大学刘圆教授鉴定。
2实验方法与结果
2.1色谱条件色谱柱为迪马C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相为纯甲醇；流速为1.0 mL/min；柱温25 ℃；蒸发光散射检测器检测参数为漂移管温度65 ℃，N2流速为2.5 L•min-1。色谱图见图1~图2。
图1β-谷甾醇对照品HPLC色谱图（A）
图2样品HPLC色谱图（B）
2.2对照品溶液的制备精密称取β-谷甾醇对照品10.3 mg，用甲醇溶解于50 mL容量瓶中，制成0.103 mg/mL的溶液作为对照品。
2.3样品溶液的制备精密称取白花丹药材样品约3 g，置于索氏提取器中，精密加入150 mL的甲醇溶液，索氏提取3 h，取出放冷，挥去溶剂，用甲醇溶解于25 mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。
2.4方法学考察
2.4.1标准曲线的制备分别精密吸取β-谷甾醇对照品溶液，依选定色谱条件，测定不同进样量下β-谷甾醇的峰面积值，得回归方程为：Y=1.500 5 X+5.683 6，r=0.998（n=6）。表明β-谷甾醇在0.103～2.575 μg范围内与峰面积值线性关系良好。
2.4.2精密度试验分别精密吸取β-谷甾醇10 μL，各重复进样6次，得RSD为0.015%，结果表明精密度良好。
2.4.3稳定性试验取同一样品根溶液20 μL，按选定色谱条件下于0、2、4、6、8 h测定样品溶液中β-谷甾醇峰面积值，得RSD为0.029%，表明样品稳定性良好。
2.4.4重复性试验分别精密取同一白花丹根药材6份，各约3 g，按样品溶液制备项下方法制备样品，按照选定的色谱条件测定6份样品溶液中β-谷甾醇的含量，得RSD为1.284%。
2.4.5加样回收率试验精确称取已知含量的白花丹药材9份，各约3.0 g，分别加入浓度为0.131 mg/mL β-谷甾醇对照品溶液，按样品溶液制备方法制备并测定，结果见表1。
表1β-谷甾醇加样回收率试验结果（n=9）
序号样品含量
（mg）加入量
（mg）测得量
（mg）回收率
（%）平均回收
率（%）RSD
（%）11.89980.73302.635598.8621.89990.73302.635999.9731.89960.73302.635899.0241.89761.45203.3548100.2551.90071.45203.355598.99100.060.634061.89241.45203.336399.6171.90262.15504.0775100.5981.90092.15504.032299.2491.89452.15504.0694100.522.5样品含量测定取白花丹野生1~12月份药材根、茎、叶按2.3项下样品溶液的制备方法制备，进样量为10 μL，测定β-谷甾醇的含量，结果见表2。
表21~12月份根、茎、叶中β-谷甾醇的含量（n=3）
月份部位β-谷甾醇的含量
（%）月份部位β-谷甾醇的含量
（%）根0.06327根0.05811茎0.0631茎0.0605叶0.1092叶0.1297根0.04188根0.06082茎0.0595茎0.0596叶0.1244叶0.1207根0.04589根0.01123茎0.0874茎0.0738叶0.1367叶0.0898根0.064610根04茎0.0618茎0.0526叶0.0997叶0.1086根0.062811根0.06815茎0.0673茎0叶0.1251叶0.0621根0.048712根0.03786茎0.0621茎0.0435叶0.0842叶0.04243小结与讨论
野生白花丹1~12月份药材根中β-谷甾醇含量变化范围为0 %～0.0681 %，茎中β-谷甾醇含量变化范围为0 %～0.0874 %，叶中β-谷甾醇含量变化范围为0.0424 %～0.1367 %。白花丹药材中β-谷甾醇含量在叶中含量最高，根中含量最低或未检出，说明有些少数民族地区采用叶来抗炎、消肿是有科学依据的。野生白花丹叶可作为再生资源。由含量变化可看出β-谷甾醇含量在3、5、7、8月份最高，冬季含量最低。
参考文献：
［1］宋立人，洪 恂，丁绪亮，等.现代中药学大词典［M］.上册.北京：人民卫生出版社，2001：283.
［2］甘炳春，杨新全，李榕涛.黎族民间治疗外伤药用植物的收集整理［J］.中国民族民间医药杂志，2005，77：357~360.
［3］张秀兰，史瑞芽.白花丹煎剂外洗治疗疮疡206 例的护理［J］.护理学杂志，1993，8（5）：223.
［4］赵霞，陆阳.不同剂量白花丹醌对猪多形白细胞中花生四烯酸的代谢产生相反作用［J］.中草药，1996，27（5）：315.
［5］赵铁建，钟振国，方卓，等.白花丹提取物抗小鼠肝纤维化作用的研究［J］.广西中医药，2005，28（4）：50~52.
［6］赵艳丽，陆道培.白花丹醌对人急性早幼粒细胞白血病细胞的体外效应［J］.中国实验血液杂志，2006，14（2）：208~211.
［7］刘圆，刘超，颜晓燕，等.白花丹不同提取部位体外抗肿瘤及急毒研究［J］.中国药理学通报，2007，23（4）：557~558.
［8］张吉仲，刘圆，焦涛.白花丹不同有机溶剂提取物和白花丹醌对移植性乳腺癌和S180肉瘤的作用［J］.2008，24（8）：1040~1043.
（收稿日期：2011-10-14）
本文为全文原貌 未安装PDF浏览器用户请先下载安装 原版全文
