氨基糖苷类抗生素_肺炎克雷伯菌氨基糖苷类修饰酶基因检测的临床应用
时间：2019-01-15 04:32:23 来源：达达文档网 本文已影响 人 
[摘要] 目的 评价应用检测氨基糖苷类修饰酶基因判断肺炎克雷伯菌对氨基糖苷类抗菌药物耐药性。方法 对61株肺炎克雷伯菌采用KB纸片扩散法进行药敏试验,再采用聚合酶链反应检测氨基糖苷类修饰酶基因并比较分析。结果 61株肺炎克雷伯菌对AMK 、GEN 、TOB 、NET耐药率分别为52.4%、86.9%、91.8%、78.7%;氨基糖苷类修饰酶基因检出率(56/61)91.8%,其中aac(3)Ⅰ、aac(3)Ⅱ、aac(6′)Ⅰ、aac(6′)Ⅱ、ant(3″)Ⅰ、ant(2″)Ⅰ检出率分别为13.1%、60.7%、55.7%、4.0%、6.6%、26.2%。结论 采用聚合酶链反应法检测肺炎克雷伯菌氨基糖苷类修饰酶基因判断耐药与KB纸片扩散法高度一致,灵敏度高,特异性强,是筛选氨基糖苷类抗菌药物耐药的可靠方法。
[关键词] 肺炎克雷伯菌; 氨基糖苷类修饰酶基因 ; 纸片扩散法 ; 耐药性
肺炎克雷伯菌是引起医院感染和社区感染常见病原菌,常导致传播和流行,而且近年呈上升趋势,并表现出多重耐药性[1]。对此需要建立一种简便、灵敏度高、特异性强的方法,用来监测对氨基糖苷类抗菌药物的耐药性。因此,笔者对临床分离的61株肺炎克雷伯菌,采用KB纸片扩散法进行药敏试验,再采用聚合酶链反应检测氨基糖苷类修饰酶基因并比较分析。
1 资料与方法
1.1 菌株来源 2007年10月至2008年12月,本院各种临床标本中分离鉴定61株肺炎克雷伯菌,质控菌株大肠埃希菌ATCC25922、肺炎克雷伯菌ATCC700603购自卫生部临床检验中心。
1.2 药敏试验 采用KB纸片扩散法进行药敏试验,结果按2007年CLSI标准判断。药敏纸片购自杭州天和微生物试剂有限公司,阿米卡星(AMK)、庆大霉素(GEN)、奈替米星(NET)、妥布霉素(TOB)。MH培养基干粉为Oxoid公司产品。
1.3 氨基糖苷类修饰酶基因检测 采用聚合酶链反应法,扩增仪为美国PE公司产品,凝胶分析仪为美国BioRad公司产品。aac(3)Ⅰ、aac(3)Ⅱ、aac(6′)Ⅰ、aac(6′)Ⅱ、ant(3″)Ⅰ、ant(2″)Ⅰ引物合成参照文献[4]。
2 结果
2.1 药敏试验结果 61株肺炎克雷伯菌氨基糖苷类抗菌药物的耐药结果,见表1。
2.2 61株肺炎克雷伯菌氨基糖苷类修饰酶基因检测结果 61株肺炎克雷伯菌氨基糖苷类修饰酶基因检出率91.8%(56/61),携带2种以上氨基糖苷类修饰酶基因47.5%(29/61),见表2。
3 讨论
肺炎克雷伯菌对氨基糖苷类抗菌药物耐药的主要原因是通过质粒介导和染色体基因突变产生氨基糖苷类修饰酶,有核苷转移酶、乙酰转移酶、催化氨基糖苷类药物、氨基或羟基的共价修饰,导致氨基糖苷类药物与核糖体的结合减少,细菌对药物摄取的EDPⅡ途径被阻断而导致耐药[2]。氨基糖苷类修饰酶由质粒染色体编码,通常由可移动DNA片段携带,质粒的交换和转座子作用都有利于耐药基因渗入到敏感菌遗传物质内[3]。61株肺炎克雷伯菌中有56株耐药基因检出率与KB纸片扩散法耐药表型高度相符,结果与王琴等[4]相近,有2株表型敏感检出耐药基因,3株表型耐药细菌未检出耐药基因,仅检出一种基因表现出对多种氨基糖苷类抗菌药物耐药。GEN、NET、TOB表型耐药细菌均检出耐药基因,但AMK不同,耐药基因的检出率明显高于表型耐药,可能AMK对aac稳定性较高相符合,KB纸片扩散法不能检出而导致耐药率不同。表明KB纸片扩散法存在局限性,而氨基糖苷类修饰酶基因检测灵敏度高、特异性强,能较客观反映细菌对氨基糖苷类抗菌药物的耐药性。
参考文献
[1] 童能胜,鞠萍,骆明惠,等.医院感染肺炎克雷伯菌连续6年耐药性监测研究.中华医院感染杂志,2007,17(5):589590.
[2] 王玉红,邓敏,曾吉. 肺炎克雷伯菌耐药机制研究进展. 中华医院感染杂志,2007,17(4):478480.
[3] Perez Moreno MO,Carsilla M.Mechanis of reduced susceptility to amoxicillinclavulanic acid in Escherichia coli strain from the health reion of Tortosa (cafalonia,spain).clin Microbiol Infect,2004,10(30):234.
[4] 王琴,杨萍,胡静仪,等.60株肺炎克雷伯菌多重耐药性及主要耐药基因的研究.天津医药,2005,33(6):338340.
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