大鼠糖尿病肾病各期时间 中药复方对糖尿病肾病大鼠肾皮质胞外调节蛋白激酶活性的影响
时间：2019-01-26 04:50:52 来源：达达文档网 本文已影响 人 
摘要：目的：观察中药复方对糖尿病肾病大鼠肾皮质中磷酸化胞外调节蛋白激酶活性变化、脂质代谢、氧化-抗氧化系统及肾脏病理变化的影响。探讨中药复方对糖尿病肾病肾脏的保护作用机制。方法：雄性Wistar大鼠33只，随机取出10只为正常组，其余大鼠用高糖高脂饲料喂养1个月后，腹腔注射链脲佐菌素建立早期糖尿病肾病模型。将大鼠随机分为正常组、模型组、中药治疗组。中药复方水煎剂浓度：2kg/L生药，中药组在成模后2周开始给药［20.30g/（kg•d）］灌胃；正常对照组及模型组灌服相应容量（10mL/kg）的生理盐水，1次/天，连续6周。检测血糖(GLu)、血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL)、尿微量白蛋白(uALB)、肾组织中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)，用蛋白质印迹杂交方法(Western Blot)检测肾皮质磷酸化胞外调节蛋白激酶(pERK)水平，并观察肾组织病理变化。结果：治疗组GLu、TC、TG、LDL、uALB、MDA的水平比模型组均降低，肾组织中SOD水平比模型组升高。肾皮质中pERK水平比模型组明显下调，肾组织病理变化相应减轻。结论：①胞外调节蛋白激酶参与了糖尿病肾病的发生与发展；②胞外调节蛋白激酶活化与糖尿病肾病高血脂和氧自由基有关；③中药复方对糖尿病肾病肾脏的保护作用，可能与抑制胞外调节蛋白激酶活性、降低高血脂有关；并对肾内活性氧代谢具有调节作用。
关键词：中药复方；糖尿病肾病大鼠；磷酸化胞外调节蛋白激酶1/2
中图分类号：R285.5 文献标识码：A 文章编号：1673-7717（2008）04-0832-04
糖尿病肾病(DN)是导致终末期肾衰的最主要原因之一，迄今为止，DN确切发病机制尚未完全阐明。最近研究发现胞外调节蛋白激酶(ERK)与糖尿病肾病的发生与发展有密切关系。ERK是细胞信号中传递丝裂原信号的关键激酶，当ERK激活后，可调节转录因子活性，产生细胞效应，参与DN细胞外基质的积聚。ERK在DN发病中的作用已受广泛关注。本实验观察中药复方对ERK在DN大鼠肾皮质中表达的影响及肾组织的病理改变，探讨其作用机制。
1材料和方法
1.1材料
用自动生化分析仪测定GLu、TC、TG、LDL；用放免法测uALB；黄嘌呤氧化酶法测SOD；硫代巴比妥酸法测MDA；SOD与MDA试剂盒由南京建成生物技术研究所提供。用Western Blot法检测肾皮质中pERK1/2(由大连宝生物工程有限公司提供)。
链脲佐菌素(STZ)：为美国Sigma公司产品，购于北京邦定泰克生物制药有限公司，临用前溶于0.1mol/L,PH4.2无菌枸橼酸钠缓冲液，配成1%溶液。
中药复方制剂：由黄芪、黄精、山药、大黄、丹参、茯苓、泽泻及益母草药物组成，购于沈阳军区总医院药局，由沈阳军区总医院中药局制剂室煎制（汤剂浓度：相当于生药2g/mL）。
1.2实验方法
Wistar大鼠33只，雄性，体质量（200±20）g，由沈阳军区总医院实验动物中心提供。动物使用许可证：SYXK(军2002-019)。
动物模型与分组：大鼠33只，适应性饲养1周。1周后随机取10只为正常对照组，给予普通饲料，余23只给予高糖高脂饲料，喂养1个月后造模。造模前禁食12h，然后以50mg/kg链脲佐菌素1次腹腔注射， 正常对照组注入等容量枸橼酸缓冲液。造模过程中死亡1只。血糖值大于16.7mmol/L的22只，列入观察对象。按血糖值随机将大鼠分为模型组与治疗组每组11只，另10只为正常对照组。中药治疗组剂量按人体-大鼠体表面积比值换算出大鼠的等效剂量。治疗组给予20.30g/（kg•d）灌胃（1mL/100g体重）；正常对照组及模型组灌服相应容量（1mL/100g体重）的生理盐水, 各组每天灌胃1次, 连续6周。实验期间自由饮水，未使用胰岛素和其它降糖药。
肾脏病理检查：取肾脏组织，进行光镜和电镜形态学观察。
采用蛋白质印迹杂交法检测磷酸化胞外调节蛋白激酶1/2。
1.3主要观察指标
血糖、血清总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇、尿微量白蛋白、肾组织中超氧化物歧化酶、丙二醛、磷酸化胞外调节蛋白激酶1/2 。
1.4统计学处理
实验结果均采用±s表示。用SPSS Ver10.00统计软件用两组均数比较t检验及相关分析，以P
3.3氧自由基与胞外调节蛋白激酶
在正常情况下，机体内自由基的产生与消除保持动态平衡。当自由基产生过多或清除能力下降，在体内积聚时，会使脂质 蛋白质及核酸受损害，导致细胞结构破坏。在糖尿病状态下，氧自由基增多对DN的发生和发展起重要作用。本研究结果显示模型组大鼠肾组织中MDA 增多，表示自由基生成增多，SOD减少，表示清除氧自由基能力下降。用中药治疗后 MDA 减少，SOD 活性升高。证实了中药对肾内活性氧代谢具有调节作用。但其抗氧化机制目前尚不十分清楚。笔者推测抗氧化机制部分与纠正脂代谢紊乱，上调SOD活性有关。最近有学者报道，多种细胞因子诱导的系膜细胞中氧化应激产物增多，可激活ERK,进而导致细胞增殖［7］。用抗氧化剂 -硫辛酸对其有抑制作用［8］过氧化氢也可活化系膜细胞中的ERK，血小板衍化生长因子对其有协同作用［9］。中药复方通过对磷酸化ERK在糖尿病肾病肾皮质中表达的影响及与高血脂 ，氧自由基之间相互关系的探讨，揭示其作用机理，为糖尿病肾病的防治提供科学理论依据。
总之，本中药复方依据DN早期气阴两虚，痰浊血瘀基本病机，采用益气养阴，祛痰活血化瘀的基本治疗大法，治疗后明显减轻DN肾脏病理变化。其机理可能与降血脂，减少氧自由基，明显抑制ERK的活性有关。提示中药复方对DN肾脏的保护作用可能部分通过抑制ERK 的活性而实现。
参考文献
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