大鼠佐剂性关节炎【四神煎对佐剂性关节炎大鼠细胞因子的影响】
时间：2019-01-26 04:50:47 来源：达达文档网 本文已影响 人 
摘要：目的：通过对大鼠完全弗氏佐剂性关节炎动物模型进行观察，探讨四神煎对该动物模型细胞因子的影响。方法:观察四神煎不同剂量组与雷公藤多苷片对大鼠完全弗氏佐剂性关节炎动物模型IL-1、IL-4、IL-6、IL-8、TNF-α进行观察。结果: 四神煎各剂量组均有消肿作用，均可降低炎性细胞因子，抑制作用优于雷公藤多苷片。结论: 四神煎治疗类风湿关节炎的机理可能是通过抑制炎性细胞因子实现的。
关键词：四神煎；类风湿关节炎；大鼠完全弗氏佐剂性关节炎动物模型；细胞因子
中图分类号：R285.5 文献标识码：A 文章编号：1673-7717（2008）04-0777-03
类风湿关节炎（RA）是以周围关节对称性炎症为主、慢性病程伴反复发作的全身性自身免疫性疾病。笔者以清解伏毒，透热达邪为大法，临床上应用四神煎治疗RA取效甚佳。为进一步研究其作用机理，笔者对大鼠完全弗氏佐剂性关节炎动物模型进行观察，探讨四神煎对该动物模型细胞因子的影响。
1一般材料
1.1受试动物雌性8周龄Wistar大鼠，体重（150±20）g，SPF级，动物许可证号：SCXK（鲁）20050015。由山东中医药大学实验动物中心提供。
1.2受试药物四神煎组成：金银花、生黄芪、川牛膝、石斛、远志，由山东中医药大学附属医院调配，水煎浓缩成分别含生药0.75g•mL-1、1.5g•mL-1、3.75g•mL-1的药液备用。雷公藤多苷片：黄石飞云制药有限公司，批号：20050301，规格：10mg。
1.3药品与试剂完全弗氏佐剂，美国SIGMA公司生产。IL-1、IL-4、IL-6、IL-8、TNF-α试剂盒均购自解放军总医院科技开发中心放免所，批号:20050601。
1.4实验仪器电子天平：ME2355型，SARTORIUS公司。离心机：biofuge型，KENDRO公司。光学显微镜：CX41型，OLYMPUS公司。全封闭自动脱水机：ASP300型，LEICA公司。自动包埋机：EG1160型，LEICA公司。石蜡切片机：RM2135型，LEICA公司。全自动放射免疫γ计数器：GMJ型，江苏医疗电子研究所。冷冻离心机：DDL-5型，上海安亭科学仪器厂。721分光光度计：上海第三分析仪器厂。游标卡尺：0－150mm，上海测绘仪器厂。
2 实验方法
2.1造模与用药取雌性8周龄Wistar大鼠，共60只，体重（150±20）g，随机分为6组，饲养1周。空白组：10只，不造模，不用药，正常饲料喂养；造模组大鼠右后足跖皮下注射完全弗氏佐剂1mL；模型组：10只，造模后不用药，正常饲料喂养；对照组：10只，造模后第1天开始以雷公藤多苷片按2mg/100g剂量灌胃，每只每天以雷公藤多苷片4mg于2.5mL生理盐水中制成悬浊液灌服；中药高剂量组：10只，造模后第1天开始以四神煎加味按5.10g/100g剂量灌胃，每只每天灌服2.5mL；中药中剂量组：10只，造模后第1天开始以四神煎加味按2.04g/100g剂量灌胃，每只每天灌服2.5mL；中药低剂量组：10只，造模后第1天开始以四神煎加味按1.02g/100g剂量灌胃，每只每天灌服2.5mL。人－鼠服药剂量按60kg人的体表面积换算方法计算，雷公藤多苷片人的服药剂量按说明书推荐的1mg•kg-1•d-1计算。各给药组每日用药，共持续22天。
2.2观察与测量实验中观察各大鼠精神状况、活泼程度、皮毛色泽、饮食、二便，前、后足跖肿胀程度，耳、鼻、尾是否出现小结、结缔组织肿胀。以0～150mm游标卡尺于每只大鼠右后足跖中后1/3处测量厚度。造模后定期测量。
2.3实验室指标测定用药22天后，以20％乌来糖溶液2mL/100g腹腔注射，麻醉动物。下腔静脉取血，离心后取血清，吸入带盖小试管内，保存在－24℃冰箱内。取放免试剂盒，按操作要求分别加样，充分混匀，室温放置20min，然后在4℃，3500r/min，离心25min，吸弃上清液，测各管沉淀部分的放射性计数。
2.4组织病理切片每组各2只，以锐利刀片切取右膝关节囊，置于10％中性甲醛溶液固定48h，10％甲酸甲醛脱钙液脱钙10天，常规石蜡包埋，5μm纵向切片，每只关节囊各做一张切片，分别进行HE染色。
2.5统计方法所有数据均用“均数±标准差”表示，计量资料方差齐时用t检验，方差不齐用t′检验,计数资料用卡方检验。
3实验结果
3.1对佐剂性关节炎大鼠足肿胀的影响各组大鼠造模后第1天均出现右后足跖明显肿胀。造模后第4天，大鼠右侧致炎足的原发性肿胀达到高峰；造模后7天左右，左侧非致炎足开始出现继发肿胀。16天左右，继发肿胀趋于稳定。前足跖未出现明显肿胀，耳、鼻、尾未出现小结、结缔组织肿胀。其结果见表1。
3.3对佐剂性关节炎大鼠组织病理改变的影响空白组：关节囊内纤维结缔组织较少，有少量慢性炎细胞，无充血、水肿。模型组：关节囊内纤维结缔组织明显增生，有肉芽组织形成，大量慢性炎细胞浸润，充血、水肿明显。各用药组：均有明显改变，纤维结缔组织增生有改善，慢性炎细胞明显减少，充血水肿减轻。中药各剂量组较对照组改善明显。其结果见图1。
4 讨论
通过长期临床观察，笔者发现脏腑蕴热、邪毒内伏为RA的根本内因，感受风寒湿邪是形成本病的外在条件。外邪引动内邪，湿热毒邪痹阻经络，流注骨节、筋脉是RA主要病机。通过清解伏毒，透热达邪为主治疗RA取得了良好疗效。四神煎出自清•鲍相敖《验方新编•卷八•腿部•两膝疼痛》，是治疗鹤膝风的专病专方，具有清热解毒、益气托毒、蠲痹止痛作用。
研究证实，细胞因子在RA中发挥着重要作用。目前认为IL-1是参与进展期关节破坏的典型前炎症细胞因子，而TNF-α在炎症反应过程中有关键作用。体内抗IL-4和IL-10可抑制基质金属蛋白酶产生，抑制IL-1、6、8和TNF-α释放，并促进IL-1受体拮抗剂和可溶性受体的产生。然而，只有维持抗细胞因子的治疗才能长期控制病情的发展，一旦停止治疗，则病情复发。因此，一个相对简单的独立的细胞因子网络观点尚不足以解释RA的迁延性。有些新的细胞因子作为靶标正处于研究中。
因此如果抑制细胞因子，就能够抑制RA进展。笔者通过雷公藤多苷组、中药各剂量组对佐剂性关节炎大鼠治疗前后的足肿胀程度及细胞因子比较，以及模型组和中药各剂量组对炎性细胞因子影响的比较，可看出四神煎对RA的效果可能是通过降低炎性细胞因子，从而消除滑膜细胞炎症而实现。
