类风湿性关节炎患者血清中IL-35、VitD、IL-33及其受体ST2表达水平及临床意义

郭燕妳　刘小君　许海涛

【摘要】 目的：了解類风湿性关节炎（rheumatoid arthritis，RA）患者血清中白细胞介素-35（IL-35）、25-羟基维生素D3[25-（OH）VitD3]、IL-33及其受体ST2（ST2）表达水平，并探讨其临床意义，为RA的诊断提供参考依据。方法：选择2017年3月-2019年4月来医院风湿科门诊或住院部就诊并确诊为RA患者129例为RA组，同期来医院体检的健康人群100名为HC组，采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测血清中IL-35、IL-33及ST2水平，采用化学反光分析仪检测25-（OH）VitD3水平，并对检测结果进行统计分析。结果：RA组患者IL-35和25-（OH）VitD3水平分别为（23.80±10.97）pg/ml和（34.68±6.63）nmol/L，明显低于HC组的（91.54±22.52）pg/ml和（62.91±13.75）nmol/L，而IL-33和ST2水平分别为（29.56±3.83）pg/ml和（18.32±3.49）ng/ml，明显高于HC组的（6.37±0.91）pg/ml和（7.05±0.74）ng/ml，差异均有统计学意义（P<0.05）;IL-35和25-（OH）VitD3水平随着RA患者病情严重程度的加重而降低，而IL-33和ST2水平随着RA患者病情严重程度的加重而升高，差异有统计学意义（P<0.001）;RA男性患者25-（OH）VitD3水平为（45.79±8.36）nmol/L，明显高于女性患者的（31.01±6.27）nmol/L，差异有统计学意义（P<0.05），而IL-35、IL-33及ST2水平差异无统计学意义（P>0.05）;经Pearson相关分析，IL-35与25-（OH）VitD3水平呈明显正相关（P<0.05），与IL-33和ST2水平呈明显负相关（P<0.05），而IL-33与ST2水平呈明显正相关（P<0.05）。结论：RA患者IL-35和25-（OH）VitD3水平明显降低，而IL-33和ST2水平明显升高，且与病情密切相关。因此，加强IL-35、25-（OH）VitD3、IL-33及ST2水平监测，对RA患者的诊断及病情判断具有一定的参考价值。

【关键词】 白细胞介素-35 25-羟基维生素D3 白细胞介素-33 可溶性生长刺激表达基因2 类风湿性关节炎

doi：10.14033/j.cnki.cfmr.2020.21.002 文献标识码 A 文章编号 1674-6805（2020）21-000-04

Expression Levels of IL-35， VitD， IL-33 and Its Receptor ST2 in Serum of Rheumatoid Arthritis Patients and Their Clinical Significance/GUO Yanni， LIU Xiaojun， XU Haitao. //Chinese and Foreign Medical Research， 2020， 18（21）：
-7

[Abstract] Objective：
To investigate the expression levels of interleukin-35 （IL-35）， 25-hydroxyvitamin D3[25-（OH） VitD3]， IL-33 and its receptor ST2 （ST2） in serum of patients with rheumatoid arthritis （RA）， and to explore its clinical significance， so as to provide reference for the diagnosis of RA. Method：
From March 2017 to April 2019， 129 patients who visited the outpatient department or inpatient department of the rheumatology department of the hospital and were diagnosed as RA patients were selected as RA group， at the same time 100 healthy people for physical examination were selected as HC group， by using enzyme-linked immunosorbent （ELISA） to detect the serum level of IL-35， IL-33 and ST2， using chemical reflective analyzer test 25-（OH） VitD3 level， and the testing results were analyzed. Result：
The levels of IL-35 and 25-（OH） VitD3 in the RA group were （23.80±10.97） pg/ml and （34.68±6.63） nmol/L， respectively， which were significantly lower than （91.54±22.52） pg/ml and （62.91±13.75） nmol/L in the HC group， while the levels of IL-33 and ST2 were （29.56±3.83） pg/ml and （18.32±3.49） ng/ml， respectively， which were significantly higher than （6.37±0.91） pg/ml and （7.05±0.74） ng/ml in the HC group， the differences were statistically significant （P<0.05）. The levels of IL-35 and 25-（OH） VitD3 decreased with the aggravation of disease severity in RA patients， while the levels of IL-33 and ST2 increased with the aggravation of disease severity in RA patients， the differences were statistically significant （P<0.001）. The level of 25-（OH） VitD3 in male patients with RA was （45.79±8.36） nmol/L， significantly higher than （31.01±6.27） nmol/L in female patients， the differences were statistically significant（P<0.05）， but the difference of IL-35， IL-33 and ST2 levels was not statistically significant （P>0.05）. Pearson correlation analysis showed that IL-35 was positively correlated with 25-（OH） VitD3 （P<0.05）， negatively correlated with IL-33 and ST2 （P<0.05）， and positively correlated with il-33 and ST2 （P<0.05）. Conclusion：
In patients with RA， the levels of IL-35 and 25-（OH） VitD3 were significantly decreased， while the levels of IL33 and ST2 were significantly increased， which were closely related to the disease. Therefore， strengthening the monitoring of IL-35， 25-（OH） VitD3， IL-33 and ST2 levels has certain reference value for the diagnosis and condition judgment of RA patients.

[Key words] Interleukin-35 25-hydroxyvitamin D3 Interleukin-33 Soluble growth stimulation expression gene 2 Rheumatoid arthritis

First-authors address：
Shenzhen Hospital （guangming）， University of Chinese Academy of Sciences， Shenzhen 518106， China

类风湿性关节炎（rheumatoid arthritis，RA）是以关节滑膜炎为主要特征、临床上常见的一种自身免疫性关节性疾病，其发病机制目前尚未完全明确[1-2]。有研究表明，RA发病可能与成纤维样滑膜细胞异常增生及多种炎性细胞因子浸润导致软骨和骨质破坏有关[3]。其中IL-35是调节性T细胞发挥最大抑制效应的一种抑炎因子，参与多种免疫性疾病的发生和发展[4-5]。维生素D（VitD）主要功能是维持体内钙、磷平衡，但最近研究发现，其在调节机体免疫、抑制炎症反应方面也起着重要作用[6-7]。IL-33是一种前炎性因子，当机体受到刺激时，IL-33与及其受体ST2结合，募集下游炎性因子，通过相应免疫通路参与炎症、自身免疫性及心血管疾病发生和发展[8-10]。为此，本研究旨在通过对RA患者和健康人群IL-35、25-（OH）VitD3、IL-33及ST2水平进行对比分析，了解其在RA患者中的变化情况，并探讨其临床意义，为RA早发现、早诊断及病情严重程度的判断提供参考依据，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

收集2017年3月-2019年4月来中国科学院大学深圳医院（光明）风湿科门诊或住院部就诊并确诊为RA患者129例。（1）纳入标准：①所有患者均符合2010年美国风湿学会联合欧洲抗风湿联盟修订的RA分类标准，并根据RA疾病活动度评分DSA28对患者的病情严重程度进行分期[11]，其中轻度活动组47例（DSA28<3.2），中度活动组52例（3.25.1）;②心、肝及肾功能等重要脏器功能均正常。（2）排除标准：①自身免疫性疾病;②骨与关节相关性疾病;③精神病及严重器质性疾病;④怀孕及哺乳期妇女;⑤风湿、类风湿家族史;⑥冠心病、高血压、脑血管及糖尿病。其中男32例，女97例，年龄33～79岁，平均（52.26±12.08）岁。同期来医院体检的健康者100例，其中男26例，女74例，年龄31～76岁，平均（51.02±11.63）岁。确保两组的性别、年龄等一般性资料比较差异无统计学意义（P>0.05），具有可比性。所有研究均知情并签订知情同意书。

1.2 方法

1.2.1 标本采集 所有研究对象均于清晨采用一次性采血针抽取空腹静脉血3～5 ml 2份，室温静置30 min后离心10 min（2 000 r/min）分离血清，于当日内完成所有项目检测，不能及时检测的血清标本置于-20 ℃保存，检测时取出复溶后于室温静置30 min混匀后才进行检测。

1.2.2 IL-35、25-（OH）VitD3、IL-33及ST2水平检测 采用酶联免疫吸附双抗体夹心法（ELISA）对IL-35、IL-33及ST2水平进行检测，检测前对相关仪器进行保养和校正，并于试验中设有空白、阴性、阳性及质控孔，待上述所有孔的OD值均在范围内才对研究对象结果进行判读，否则要重新进行试验;同时采用化学发光分析仪对25-（OH）VitD3水平进行检测。所有所有操作均严格按照试剂盒、仪器说明书及科室SOP操作规程进行，由相同的专业人员进行成批检测，确保结果的准确性和可比性。

1.3 统计学处理

采用GraphPad Prism 5统计软件对所测数据进行统计分析，计量资料以（x±s）表示，采用t检验，多组间计量资料比较采用单因素方差分析，计数资料以率（%）表示，采用字2检验，采用Pearson 相关分析分析相关性，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组IL-35、25-（OH）VitD3、IL-33及ST2水平比较

RA组患者血清中IL-35和25-（OH）VitD3水平明显低于HC组，而IL-33和ST2水平明显高于HC组，差异均有统计学意义（P<0.05），见表1。

2.2 不同病情严重程度RA患者IL-35、25-（OH）VitD3、IL-33及ST2水平比较

IL-35和25-（OH）VitD3水平随着RA患者病情严重程度的加重而降低，而IL-33和ST2水平随着RA患者病情严重程度的加重而升高，差异有统计学意义（P<0.001），见表2。

2.3 不同性別RA患者IL-35、25-（OH）VitD3、IL-33及ST2水平比较

男性RA患者血清中25-（OH）VitD3水平明显高于女性患者，差异有统计学意义（P<0.05），而IL-35、IL-33及ST2水平之间差异无统计学意义（P>0.05），见表3。

2.4 相关性分析

经Pearson相关分析，血清中IL-35与25-（OH）VitD3水平呈明显正相关（r=0.701 2，P<0.05），与IL-33和ST2水平呈明显负相关（r=-0.718 3，-0.627 6，P<0.05），而IL-33和ST2水平呈明显正相关（r=0.812 4，P<0.05）。

3 讨论

RA是一种以慢性、侵蚀性关节炎为主要特征的全身性自身免疫性疾病，是临床上较为常见的一种关节性疾病，全球发病率为0.5%～1.0%，我国约为0.42%，近年来有呈上升趋势[12-13]。其主要病理改变为慢性滑膜炎、血管翳形成及关节软骨和骨破坏，导致关节畸形，甚至功能丧失，致残率较高，是导致劳动力丧失和致残的主要原因之一，严重影响患者生活质量[14-15]。因此，RA早期诊断尤为关键，但RA临床症状不典型，表现多元化，且病因尚未完全明确，给诊断工作造成极大困难。为此，寻找新的诊断指村或多项指标优化联合检测，对RA早期诊断、治疗及病情严重程度判断具有重要的意义。

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（收稿日期：2020-03-10） （本文编辑：张亮亮）