地黄多糖对过氧化氢损伤大鼠脂肪间充质干细胞的保护作用:过氧化氢使多糖脱色

时间：2019-01-26 04:50:33　来源：达达文档网本文已影响人

　　摘要：目的：研究地黄多糖对过氧化氢损伤大鼠脂肪间充质干细胞（ADMSCs）的保护作用，为ADMSCs的应用提供实验依据。方法：分离、培养并鉴定大鼠脂肪间充质干细胞。取第3代ADMSCs，随机分为7组，A：H2O2损伤组；B、C、D、E、F分别为H2O2损伤加地黄多糖各浓度作用组（1mg/L、10mg/L、50mg/L、100mg/L、200mg/L）；G：正常对照组，对应于分组，加入不同浓度地黄多糖培养24h，加250μmol/L过氧化氢（H2O2）作用2h，诱导ADMSCs损伤，然后用MTT法检测细胞存活情况，比色法检测细胞培养上清中乳酸脱氢酶（LDH）的水平。结果：A组与G组相比较存活细胞显著减少（P 　　目前研究[1,4-5]已经证明ADMSCs可以成功分化为骨、软骨、骨骼肌、心肌、血管内皮、脂肪、神经等组织细胞，并且可以作为目的基因的载体[6]，移植后可以改善相应的机体功能。2006年Timper K等[7]报道，ADMSCs可以成功诱导分化为分泌胰岛素的细胞。但ADMSCs在实际应用中还有许多问题有待进一步研究：如ADMSCs移植到体内或梗死区后能否继续存活，怎样提高移植细胞在梗死区的存活率；ADMSCs在梗死区能够起到修复组织、改善功能的作用，具体机制是什么； ADMSCs发育的基因调控和微环境影响等问题还需要系统的研究。
　　过氧化氢（H2O2）是一种强氧化剂，在Fe2 + 、Cu2 +等金属离子存在下，与超氧阴离子反应生成羟自由基•OH，从而引发脂质过氧化，导致细胞损伤。 LDH水平的升高是细胞受损的一个敏感指标，细胞释放LDH增加通常反映细胞受损、细胞膜通透性增加[8]。研究[9]发现在心肌缺血和缺血再灌注损伤时H2O2生成明显增多，使损伤进一步加重。本实验用H2O2作用于ADMSCs，模拟ADMSCs移植到心肌梗死区的损伤，加用地黄多糖干预，通过检测细胞存活情况和培养上清中LDH的水平，来观察地黄多糖对H2O2损伤ADMSCs是否具有保护作用，探索提高ADMSCs在有害环境中存活的有利因素，为ADMSCs的临床应用提供实验依据。
　　地黄多糖是中药地黄的主要有效成分，从地黄的根茎中提取，具有促进造血细胞增殖、增强免疫力、抗衰老、保护心、脑、肾脏和胃黏膜等多种生物学功能[10-12]。研究[13]表明地黄提取物可以不同程度的对抗肝微粒体脂质过氧化，其机理可能是通过提高血中的抗氧化相关酶，如―氧化氮合酶(NOS)、超氧化物歧化酶(SOD)等的活性,从而降低组织的过氧化脂质水平。本实验选取不同浓度地黄多糖作用于ADMSCs 24h，然后各组均加入250μmol/LH2O2继续培养2h，观察地黄多糖对H2O2损伤ADMSCs的影响。
　　实验初步发现250μmol/LH2O2作用ADMSCs2h后，损伤组与正常对照组相比OD值明显减小（P

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