紫杉烷类结构特点 [紫杉中紫杉烷和双黄酮类成分的薄层色谱鉴别]
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[摘要] 目的：建立紫杉药材中紫杉烷类和双黄酮类成分的薄层色谱鉴别法。方法：以紫杉宁为对照品，石油醚-乙酸乙酯-丙酮-甲醇（8∶2∶2∶1）为展开剂系统，用硅胶G板鉴别紫杉烷类成分；以金松双黄酮和银杏双黄酮为对照品，石油醚-乙酸乙酯-甲醇（4∶1∶1）为展开剂系统，用聚酰胺薄膜鉴别双黄酮类成分。结果：本方法斑点清晰，重复性好，并可将紫杉区别于一些松、杉、柏类植物的枝叶。结论：本方法简便，快速，可用于紫杉药材的质量控制。
[关键词] 紫杉；薄层色谱鉴别；紫杉宁；金松双黄酮；银杏双黄酮
[中图分类号] R931.5 [文献标识码]A [文章编号]1673-7210（2011）07（b）-098-03
TLC identification of the taxanes and biflavonoids in Taxus cuspidata
GU Jiaojiao, TONG Xin, YUAN Jiuzhi, MA Xiaojia, LIU Xiaoqiu
School of Traditional Chinese Materia Medica, Shenyang Pharmaceutical University, Shenyang 110016, China
[Abstract] Objective: To establish the TLC identification method of taxanes and biflavonoids in Taxus cuspidata. Methods: Taxanes identification method was presented on silica gel plate, with taxinine as reference substance, the system of a mixture of petroleum ether-ethyl acetate-acetone-methanol as developing solvent. And biflavonoids identification method was presented on polyamide film, with sciadopitysin and ginkegetin as reference substance, the system of a mixture of petroleum ether-ethyl acetate-methanol as developing solvent. Results: The established methods had good reproducibility and the spots were distinct. And the new methods could also distinguish Taxus cuspidata from some kindred plant such as Pinaceae, Taxodiaceae, Cupressaceae Plant. Conclusion: The methods are simple and fast, which can be used as quality control methods of Taxus cuspidata.
[Key words] Taxus cuspidata; TLC identification; Taxinine; Sciadopitysin; Ginkegetin
紫杉为红豆杉科红豆杉属植物东北红豆杉（Taxus cuspidata Sieb. et Zucc.）的枝和叶。《中药大辞典》记载，具有利尿、通经，治肾脏病、糖尿病等功效[1]。其化学成分主要为紫杉烷二萜类成分如紫杉宁、紫杉醇、短叶醇等，双黄酮类成分如金松双黄酮和银杏双黄酮等。现代药理研究表明，紫杉烷类化合物具有独特的抗癌活性及抗氧化应激作用[2-4]，紫杉中的双黄酮类成分对小鼠S180荷瘤、H22肝癌和Lewis肺癌等实体癌均有抑制作用，还具有清除体内自由基作用[5-6]。
由于从红豆杉科红豆杉属植物的树皮中发现了紫杉醇这一著名的抗肿瘤天然产物，红豆杉属植物成为近年来的研究热点，从红豆杉树皮中提取紫杉醇对该植物造成极大破坏，因此对红豆杉的研究也逐渐转向其可再生的枝叶等部位。目前《黑龙江省中药材标准》（2001年版）收载紫杉的药材标准，药用部位即为其枝叶，但仅有性状项，无鉴别项，且尚无有效的紫杉药材的薄层色谱鉴别报道。为了有效控制紫杉的质量和提高药材的质量标准，本文对紫杉的薄层鉴别法进行了实验研究。同时，将紫杉与一些松科、杉科、柏科等植物也进行了共薄层比较鉴别。
1 仪器与材料
ZF-1三用紫外分析仪（上海精科实业有限公司）、SG3200H超声波清洗器（上海冠特超声仪器有限公司）、硅胶G（青岛海洋化工厂）、聚酰胺薄膜（浙江省台州市路桥四甲生化塑料厂）。
紫杉宁对照品、金松双黄酮对照品和银杏双黄酮对照品（自制，纯度>95%），其他试剂均为分析纯。
药材经沈阳药科大学中药学院袁久志副教授鉴定，1~3为紫杉，4~7为红松、水杉、侧柏和圆柏，见表1。
表1 药材来源及产地
2 方法与结果
2.1 鉴别方法
2.1.1 对照品溶液的制备
分别取紫杉宁、金松双黄酮和银杏双黄酮对照品适量，用甲醇制成每1 ml含1 mg的溶液，作为对照品溶液。
2.1.2 供试品溶液的制备
分别取药材粉末各1 g，加50%丙酮溶液40 ml，超声提取（功率200 W，频率40 kHz）30 min，滤过，滤液减压蒸干（50℃以下），残渣加甲醇1 ml使溶解，作为供试品溶液。
2.1.3 测定方法及结果
2.1.3.1 紫杉烷类成分鉴别分别吸取上述各供试品溶液5 μl、紫杉宁对照品溶液2 μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以石油醚-乙酸乙酯-丙酮-甲醇（8∶2∶2∶1）10℃以下放置的溶液为展开剂展开，取出，晾干，喷以香草醛-浓硫酸试液，在105℃烘干，日光下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点（图1）。
1S2S3
S-紫杉宁，1~3：紫杉
图1 紫杉烷类TLC鉴别
2.1.3.2 双黄酮类成分鉴别分别吸取上述各供试品溶液5 μl，金松双黄酮和银杏双黄酮对照品溶液各2 μl，分别点于同一聚酰胺薄膜上，以石油醚-乙酸乙酯-甲醇（4∶1∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，在105℃烘干。置紫外灯（365 nm）下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点（图2）。
S1 S2123
本文为全文原貌 未安装PDF浏览器用户请先下载安装 原版全文 S1-银杏双黄酮， S2-金松双黄酮， 1~3：紫杉
图2 双黄酮类TLC鉴别
2.2 紫杉与松科、杉科、柏科植物枝叶的薄层色谱比较
取红松、水杉、侧柏、圆柏枝叶粉末各1 g，照“2.1.2供试品溶液制备”方法制备供试液，按“2.1.3测定方法”，将上述四种样品与各对照品溶液、紫杉供试品溶液分别点于同一硅胶G薄层板和聚酰胺薄膜上，分别进行紫杉烷类（图3-1）和双黄酮类（图3-2）的鉴别。
S 4 56 7 1 2 3
S-紫杉宁，1~3：紫杉，4~7：红松、水杉、侧柏、圆柏
图3-1 紫杉烷类TLC鉴别
S1 S2 5467123
S1-金松双黄酮；S2-银杏双黄酮；1~3：紫杉；4~7：红松、水杉、侧柏、圆柏
图3-2 双黄酮类TLC鉴别
图3 紫杉与松、杉、柏科植物枝叶的薄层色谱图
3 讨论
紫杉为枝叶类药材，含叶绿素较多，对待鉴定的脂溶性成分如紫杉烷二萜类干扰较大，因此薄层鉴别时难度较大，目前尚未有对其进行研究的相关报道，本研究对紫杉烷类薄层色谱鉴别进行色谱条件的优化，该法在供试液制备、展开剂选择及温度等方面为枝叶类药材减少叶绿素干扰及对含二萜类成分的中药进行TLC鉴别提供依据。
3.1 供试品溶液制备的考察
考虑到紫杉烷为热敏性物质，提取温度过高易变质，因此采用超声法简便快速，且不需加热，使目标成分提取充分。同时兼顾紫杉烷类和双黄酮类同时提取，溶剂分别选用甲醇、乙醇、丙酮和乙醇-乙酸乙酯超声提取[7]，试验中采用石油醚、中性氧化铝柱和活性炭吸附等常用的除叶绿素方法，但均较繁杂，且效果不理想。通过选用50%丙酮进行直接提取可以同时将紫杉烷类和双黄酮类成分提取出来，并且色素较少，易于鉴别。
3.2 展开剂的选择
曾根据文献考察二氯甲烷-甲醇[8]、正己烷-氯仿-乙酸乙酯-甲醇-三乙胺[9]两种展开系统，结果显示两种系统分离效果均不好，易拖尾，成点性差。因此在试验中根据溶剂极性参数（P′）和选择性参数，结合溶剂组成的优化方法对展开剂的组成进行了优化，考虑到紫杉烷类成分极性较小，所以选用石油醚（P′=0.01）和丙酮（P′=5.4）系统调节展开剂的极性，由于紫杉烷类化合物多包含羰基或酯基的结构，所以加入乙酸乙酯增强展开剂的选择性，更适合该类成分的展开，加入适当的甲醇用于控制拖尾。实验结果显示用该系统使目标化合物能得到较好的分离效果，成点性较好。
3.3 温度的考察
将紫杉烷类成分分别在室温（20℃）及10℃以下环境下展开，结果表明温度对成点性、分离度影响较大，温度高时，薄层板上各点拖尾严重，且Rf值不稳定，而在10℃以下展开斑点集中、圆整、稳定。
3.4 紫杉与松、杉、柏科植物枝叶的TLC区别
研究中发现，经采集干燥后紫杉与松、杉、柏科植物枝叶外形相似，本研究表明它们的紫杉烷二萜类成分相差较大，可以区别，黄酮类成分除水杉外也可区别。利用本方法可以将紫杉较好的区分于松科、杉科和柏科植物，为有效评价紫杉质量提供依据。
本文对东北红豆杉TLC鉴别进行研究，对红豆杉属其他植物如云南红豆杉、西藏红豆杉、南方红豆杉和中国红豆杉的薄层色谱鉴别提供参考，有关这些红豆杉之间鉴别的一致性或差异性还有待进一步研究。
[参考文献]
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[8]张娜.栽培曼地亚红豆杉针叶的化学成分研究[D].沈阳:沈阳药科大学,2009.
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（收稿日期：2011-03-25）
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