抗丙肝药物_HCV-RNA抗-HCV和ALT联合检测在丙肝中诊断的应用
时间：2019-01-14 04:43:36 来源：达达文档网 本文已影响 人 
【摘要】 目的 探讨丙肝(抗-HCV)阳性人群中，其丙型肝炎病毒核酸(HCV RNA)含量与丙氨酸转氨酶(ALT)的关系。方法 采用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)技术检测222例丙型肝炎病毒感染者血清HCV RNA含量，采用酶联免疫法检测抗-HCV,采用酶法检测其ALT水平。结果 222例抗-HCV阳性标本中135例HCV RNA阳性(>500拷贝/ml)，阳性率为60.8%，120份标本ALT异常(>40U/L)，异常率为54%，ALT水平及异常率随HCV RNA含量的升高而增加。 结论 ALT水平及异常率与HCV RNA之间呈正相关，提示ALT水平可间接反映HCV在肝脏的复制程度，HCV-RNA含量与抗-HCV 同时检测可以提高临床对丙型肝炎的诊断，HCV-RNA是反映HCV 复制的可靠指标，结合ALT生化指标结果可帮助临床了解HCV在体内的复制状况。
【关键词】 丙型肝炎；丙肝抗体；丙型肝炎病毒核酸
Clinical application HCV-RNA anti-HCV And ALT examination in diagnosis of patients with HCV
QIAN Ming, YUAN Jun-jun, FU Jian-zhao，et al. Laboratory Department of the Fifth Affiliated Hospital of Sun Yat-sen University,Zhuhai 519000,China
【Abstract】 Objective To discuss the relationship between the HCV-RNA levels and ALT levels in the HCV masculine crowd. Methods Fluorescent Quantitative PCR methodswere used to detect the quantify of HCV-RNA in 222 anti-HCV masculine samples, the ALT were detected by automatic biochemistry analyzer. Results In 222 cases anti-HCV masculine samples,135 cases were positive of HCV-RNA and 120 caseswere positive of ALT.Masculine gender rate of HCV-RNA was 60.8%.ALT rate of abnormality was 54%. The ALT level and the rate of abnormality content ascension increased along with the HCV-RNA.Conclusion There was a corrlation between ALT levels and the concentration of HCV RNA. Prompted the ALT level to be possible to reflect HCV indirectly in the liver duplication degree，HCV-RNA levels and anti-HCV detection could improve the clinical diagnosis of hepatitis C, HCV-RNA is a reliable indicator to reflects HCV replication, combined with ALT biochemical results could help clinicians understand the status of HCV replication in the body.
【Key words】 HepatitiscHCV-RNA； Anti-HCV；HCV-RNA
全球丙肝感染率约为3%，大约117亿人感染了HCV,每年新发丙型肝炎病例315万例［1］。慢性丙肝患者10年内约有20%发展为肝硬化,肝硬化患者每年约有3%发展为肝细胞癌［2］。因此早期诊断和及时治疗尤为重要。HCV-RNA含量与抗-HCV 同时检测可以提高临床对丙型肝炎的诊断，本文检测了222例抗-HCV阳性的血清标本，探讨与HCV-RNA,ALT含量之间的关系。
1 资料与方法
1.1 一般资料 中山大学第五附属医院2005年至2009年除甲、乙、戊型肝炎患者、无肝脏肿瘤、无非特异性免疫原性肝病患者外，丙型肝炎病毒感染的住院或门诊患者222例。其中男166例，女56例；年龄7~77岁，平均为37.8岁。
1.2 标本采集 抽取EDTA-K��2�抗凝外周静脉血2 ml用于HCV RNA定量检测，及促凝外周静脉血2 ml用于ALT检测。
1.3 检测方法
1.3.1 HCV RNA测定 采用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)技术检测，仪器采用美国生产的MJ Research 2全自动荧光定量PCR仪。试剂由深圳匹基生物工程公司提供。操作按试剂盒说明书进行。HCV RNA含量的阴性参考值500拷贝/ml的标本中，92例ALT水平异常，其ALT水平及异常率随HCV RNA含量的升高而增加，经相关性分析，ALT水平及异常率与HCV RNA含量呈正相关性(r=0.986,P［3］，不能及时诊断出病毒感染，而荧光定量PCR检测HCV RNA含量，可直接反映体内HCV的活动和复制程度等优点，有利于及时诊断。近年来许多研究表明，丙肝发病过程中肝炎病毒感染使机体免疫系统活化，这些活化的细胞可与因肝炎病毒感染而改变的肝细胞膜成分发生免疫应答，从而造成肝功的改变和肝细胞的坏死［4］。表1通过血清HCV RNA含量及ALT检测结果的比较，从分子学定量角度证实了HCV RNA含量与ALT水平呈正相关，与相关研究［5-7］报告一致。ALT异常率也与HCV RNA含量呈正相关，也说明了HCV RNA是在肝细胞中复制，对细胞产生直接或间接的损害。而表2HCV-RNA阳性时肝功异常68.2%明显高于HCV-RNA阴性时32.2%。而222例抗-HCV阳性患者中有(60.8%)的患者HCV-RNA都为阳性。本文中出现的ALT水平异常，HCV RNA阴性可能由于：①丙型肝炎患者血清中病毒含量低，且具有一定波动性，在未经干扰素治疗的患者中HCV RNA可呈间歇性阳性；②HCV RNA十分脆弱，易被白细胞含有的RNA酶降解；③HCV RNA不像HBV DNA那样不受进食的影响，HCV易与迅速增高的血中脂质及脂蛋白相结合致使检出率下降；④HCV RNA的PCR包括从RNA到DNA的转录，第一次PCR及第二次PCR，其中任何步骤的问题均影响其检出［8］。同样的，本文也出现了HCV-RNA阳性，ALT水平正常的情况，这也与近年来一些研究相符合，其研究显示部分患者血清HCV-RNA含量高，但肝脏组织仅呈轻度或中度损伤。但也有个别HCV-RNA很低，却出现较严重的肝脏组织损伤，提示HCV对肝脏的损伤可能是由于免疫应答所造成的，免疫应答反应在HCV感染的发病机制中具有重要作用［9］。本文中也出现有抗-HCV阳性，HCV RNA阴性的情况，可能由于:①有些病例经过病毒治疗，使病毒复制减慢或停止，血清中的HCV RNA载量低于最少可检出值，抗-HCV在体内存在时间长(1~10年)，故可出现抗-HCV阳性，HCV RNA阴性；②由于ELISA试剂盒上包被有多种抗原成分，能检测出机体针对不同区域抗原产生的多种抗体；③急性丙肝感染恢复期, HCV 复制停止, HCV-RNA 消失,但抗-HCV持续存在。抗-HCV 是HCV 感染与既往感染的间接指标,但HCV 感染后到抗体转阳一般有一个较长的窗口期, 平均为70 d, 约1%~3%的患者抗-HCV 可持续阴性，而且抗-HCV检测存在不能区别现症感染和既往感染、受机体免疫水平影响等缺陷。HCV RNA 是HCV 复制活跃的可靠指标, 在感染HCV 1~2 周内, 血清中即可检测到HCV RNA，该技术大大缩短了检测丙肝“窗口期”，可以判断疾病是否处于隐性及亚临床状态，而且FQ-PCR检测HCV-RNA的整个过程均在完全封闭状态下进行,能有效的克服扩增产物的污染造成的假阳性,特异性与灵敏度高,易为基础实验室接受。但由于丙型肝炎病毒的遗传物质为RNA,容易受到外界RNA酶的影响，可能出现假阴性。ALT 在肝细胞中含量较多,当肝脏遭到损害时,此酶释放到血液中,故作为诊断肝炎的一项重要指标。但有时ALT与肝脏受损情况并不相符,尤其是 HCV病毒直接作用于肝脏,对肝脏造成的破坏是隐匿的。血清ALT 浓度升高不能单独由病毒载量决定, 还取决于个体的免疫应答能力。综上所述，单一地检测抗-HCV或者HCV-RNA含量从而确定丙型肝炎病毒感染存在一定风险，因此建议在以 HCV RNA为重要检测指标诊断 HCV时,应联合检测分析抗-HCV和ALT等。
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