绞股蓝皂苷提取实验出现的问题_三七总皂苷口腔崩解片质量标准研究
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[摘要]目的：研究三七总皂苷口腔崩解片制剂质量标准。方法：根据主药的化学结构及性质，对制剂进行定性鉴别；采用高效液相色谱法（HPLC）测定三七总皂苷口腔崩解片的有效成分三七总皂苷（主要包括人参皂苷Rg1、Rb1和三七皂苷R1）的含量。结果：拟定了该制剂的质量标准。结论：口腔崩解片是近年来迅速发展的一种新剂型，具有服用方便、口感好、起效快、生物利用度高、消化道黏膜刺激性小等优点。本文拟定的质量标准可用于三七总皂苷口腔崩解片的质量控制。
[关键词]三七总皂苷口腔崩解片；质量标准
[中图分类号]R92[文献标识码]A [文章编号]1673-7210（2007）10（a）-089-03
The study of quality control standard of Panax Notoginsenosides Orally Disintegrating Tablets
GUO Si-bin1,DIAO Hong-xing2,ZHANG Zhi-hao1,CHEN Chu-xiong3,CHEN Bi-fen1*
(1.The First Affiliated Hospital,Sun Yat-Sen University,Guangzhou510080,China;2.ZhongShan Ophthalmic Center,Sun Yat-Sen University,Guangzhou 510060,China;3.The 2nd Affiliated Hospital,Sun Yat-Sen University,Guangzhou 510120,China)
[Abstract]Objective:To study the quality control standard of Panax Notoginsenosides Orally Disintegrating Tablets. Methods: Qualitative identification was carried out based on the chemical configuration and property of the active components in the tablets. HPLC was established to determine the content of Panax Notoginsenosides(including ginsenosides Rg1，Rb1 and sanchinoside R1). Results: The quality control standard of Panax Notoginsenosides Orally Disintegrating Tablets was established. Conclusion: Orally Disintegrating Tablets is a new style preparation with many merits. The quality control standard established in this paper can be used for the quality control of Panax Notoginsenosides Orally Disintegrating Tablets.
[Key words]Panax Notoginsenosides Orally Disintegrating Tablets;Quality control standard
三七是一种常用的活血化淤类中草药，其主要有效成分三七总皂苷(total saponins of panax notoginseng,以下简称tPNS)是从我国名贵中药五加科植物三七Panax notoginseng (Burk.) F. H. Chen中提取的有效活性成分，主要含人参皂苷Rg1、Rb1和三七皂苷R1。口腔崩解片作为一种新的药物制剂，因其服用方便、口感好、起效快、生物利用度高、消化道黏膜刺激性小等优点而成为片剂研究开发的重点。其特点：不需用水或只需少量水，无需咀嚼，药片置于舌面，迅速崩解后借吞咽动作入胃起效。该剂型可方便部分人群用药，如吞咽因难者，不宜喝水或特殊环境下不能得到水的病人用药。本文通过对tPNS口腔崩解片的鉴别和检查，草拟出质量标准。
1 材料与方法
1.1 试剂与试药
浓硫酸、醋酐、乙酸乙酯、氯仿、甲醇均为分析纯；定性毛细管、微孔滤膜（0.8 μm）、硅胶G（粒度范围10~40 μm）、薄层板（以0.5%CMC-Na制备硅胶G板，阴干，105℃活化0.5 h）。
人参皂苷Rg1对照品（中国药品生物制品检定所，批号：110703-200322）；人参皂苷Rb1对照品（中国药品生物制品检定所，批号：110704-200318）；三七皂苷R1对照品（中国药品生物制品检定所，批号：110745-200312）；tPNS原料[批号：040202，经检验符合国家药品监督管理局国家药品标准（试行），tPNS含量：74.12%]。
1.2 仪器与设备
UV-2201型紫外可见分光光度计；LC-2010A型高效液相色谱仪（PDA检测器）；高效液相色谱液（岛津LC-2010A型，SPD-M10A检测器）；色谱柱Elite Hypersil ODS C18(200 mm×4.6 mm,5 μm)；BS110S型电子分析天平；D-800型智能药物溶出仪；ZF-6型三用紫外线分析仪；超声波清洗器。
1.3 实验方法
1.3.1 tPNS口腔崩解片的鉴别 tPNS原料主要含人参皂苷Rg1、Rb1和三七皂苷R1，tPNS属皂苷类化合物，可用Liebermann反应进行鉴别；另外，可用人参皂苷Rg1、Rb1和三七皂苷R1对照品为对照进行薄层鉴别。
13.1.1 Liebermann反应：取tPNS口腔崩解片研细后的粉末适量，加醋酐1 ml，溶解后转入试管中，沿试管壁滴加硫酸1~2滴，显紫红色，摇匀放置后显紫色。
1.3.1.2 薄层鉴别：取本品20片，研细，称定1.1 g置25 ml容量瓶中，量取90% 甲醇10 ml，超声处理10 min，继续加入90%甲醇溶液至刻度，干燥滤纸滤过，取滤液10 ml置10 ml容量瓶中，作为供试品溶液。分别精密称取60℃下干燥的人参皂苷Rb1、Rg1、三七皂苷R1对照品适量，加90%甲醇分别制成每1 ml含人参皂苷Rb11.5 mg、人参皂苷Rg11.5 mg、三七皂苷R10.4 mg的三种对照溶液。照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液和对照品溶液各1 μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-乙酸乙酯-甲醇-水（15∶40∶22∶10）10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10% 硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，显相同颜色的斑点。
本文为全文原貌 未安装PDF浏览器用户请先下载安装 原版全文 1.3.2 tPNS口腔崩解片的检查
1.3.2.1 崩解时限：测定方法：取样品1片，置事先于（37±1）℃水浴中预热的10 ml干燥烧杯中，加入（37±1）℃的水2 ml，静置，观察至完全崩解并能全部通过2号筛的时限，不得超过1 min。压制五批样品，每批分别测定6片。
体内试验：健康志愿者6人，试验开始前15 min停止饮水，每人每次口含本品1片，至完全崩解，记录崩解时间。试验间隔为15 min以上。
1.3.2.2 重量差异检查：参照《中国药典》2000年版一部附录Ⅰ制剂通则中片剂项下重量差异的检查方法检查。片重0.30 g，重量差异限度为±0.5%。对所压制的五批样品分别检查。
1.3.3 含量测定
1.3.3.1 色谱条件与系统适应性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，柱温30℃；以流动相A：乙腈，流动相B：水，按表1进行梯度洗脱；流速为1.0 ml/min；检测波长为203 nm。理论塔板数按人参皂苷Rb1计算应不低于6 000；人参皂苷Rg1和三七皂苷R1的分离度应大于2.0。
1.3.3.2 对照品溶液的制备：分别精密称取60℃下干燥的人参皂苷Rb1、Rg1、三七皂苷R1对照品适量，加90% 甲醇制成每1 ml含人参皂苷Rb11.5 mg、人参皂苷Rg11.5 mg、三七皂苷R10.4 mg的混合溶液，作为混合对照品溶液。
1.3.3.3 供试品溶液的制备：取本品20片，研细，精密称定1.1 g置25 ml容量瓶中，精密量取90%甲醇10 ml，超声处理10 min，继续加入90% 甲醇溶液至刻度，干燥滤纸滤过，取滤液10 ml置10 ml容量瓶中，作为供试品溶液。
1.3.3.4 线性范围的确定：精密吸取对照品溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0 ml分别置于10 ml量瓶中，加90%甲醇稀释至刻度，摇匀，分别取10 μl注入液相色谱仪，测定峰面积。以色谱峰面积为因变量Y，进样量为自变量X，进行线性回归，得到回归方程。
1.3.3.5 含量测定：取10 μl供试品溶液注入液相色谱仪，记录色谱图；另取混合对照品溶液10 μl注入液相色谱仪，记录色谱图。按外标法，以峰面积计算，测定五批样品的含量。
2 结果与分析
2.1 tPNS口腔崩解片的鉴别与检查
2.1.1 性状 置自然光下观察，tPNS口腔崩解片为淡黄色片，气香，味甜略苦味。
2.1.2 鉴别
2.1.2.1 Liebermann反应：样品呈阳性反应；取处方配比相应量辅料为空白对照，同法操作，未显紫红色。表明辅料对主药鉴别无影响。
2.1.2.2 薄层鉴别：展开的薄层色谱板经过显色剂显色后，供试品色谱与对照品色谱在相应位置上，显相同颜色的斑点；取处方配比相应量辅料为空白对照，同法操作，未见相同颜色的荧光斑点。表明辅料对主药鉴别无影响。
2.1.3 崩解时限各样品均能在1 min内崩解，结果客观可信（表2）；体内试验结果见表3。结果表明，体内外崩解时限有良好的相关性，体外崩解时限检查方法能够较为客观地反映口腔崩解片在体内的崩解情况。
2.1.4 重量差异检查 对所压制的五批样品分别检查，重量差异均合格。
2.2 含量测定
2.2.1 线性范围的确定人参皂苷Rg1线性范围试验结果见表4，图1；人参皂苷Rb1线性范围试验结果见表5，图2；三七皂苷R1线性范围试验结果见表6，图3。
以Y为色谱峰面积，X为进样量，进行线性回归，Rg1、Rb1、R1的回归方程分别为：Y=442 866.39X+229 293.86(r=0.999 4)、Y=357 002.21X+98 202.29(r=0.999 9)、Y=105 671.63X+3 637.86(r=0.999 9)。表明Rg1、Rb1、R1分别在2.990~20.972 μg、3.072~21.504 μg、0.800~5.600 μg范围内呈良好的线性关系。
2.2.2 tPNS口腔崩解片含量测定测定五批样品的含量，结果见表7。
3 质量标准草案
[性状] 本品为淡黄色片；气香，味甜略苦。
[鉴别]鉴别方法①取本品适量，加醋酐1 ml，振摇使溶解，沿管壁滴加硫酸2~3滴，两液交界处显紫红色。②取本品20片，研细，精密称定1.1 g置25 ml容量瓶中，量取90% 甲醇10 ml，超声处理10 min，继续加入90%甲醇溶液至刻度，干燥滤纸滤过，取滤液10 ml置10 ml容量瓶中，作为供试品溶液。分别精密称取60℃下干燥的人参皂苷Rg1、Rb1，三七皂苷R1 对照品适量，加90%甲醇制成每1 ml含人参皂苷Rb11.5 mg、人参皂苷Rg11.5 mg、三七皂苷R10.4 mg的混合溶液，作为混合对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液和对照品溶液各1 μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-乙酸乙酯-甲醇-水（15∶40∶22∶10）10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10% 硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，显相同颜色的斑点。
[检查]崩解时限取样品1片，置事先于（37±1）℃水浴中预热的10 ml干燥烧杯中，加入温度为（37±1）℃的水2 ml，静置，1 min内应全部崩解并通过 2号筛。按上述方法检查6片，各片均应符合规定。
[含量测定] 照高效液相色谱法本品每片所含三七总皂苷原料，以人参皂苷Rg1、Rb1和三七皂苷R1总量计，应为标示量的90%~110%。
[参考文献]
[1]Ma WG,Mizutani M,Malterud KE,et al.Saponins from the roots of Panax Notoginseng[J].Phytochemistry,1999,52(6):1133-1139.
[2]何忠芳,陈岚,王亚娟.口腔速崩片的研究进展及应用前景[J].兰州医学院学报,2003,29(1):89-91.
[3]叶兵,刘忠荣,及元乔,等.银杏叶口腔崩解片的研制及质量评价[J].天然产物研究与开发,2003,15(4):326-329.
（收稿日期：2007-08-12）
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