_电针对吗啡复吸大鼠条件性位置偏爱效应及脑内单胺递质的影响
时间：2019-01-26 05:01:25 来源：达达文档网 本文已影响 人 
摘要 目的:观察电针是否消除吗啡依赖大鼠条件性位置偏爱效应，探讨电针防止复吸的神经生物机制是否与影响脑内去甲肾上腺素(NE)、多巴胺(DA)、5-羟色胺(5-HT)有关。方法:将30只SD大鼠随机分为正常对照组、吗啡依赖组和电针干预组建立条件性位置偏爱模型后，各组随机选取5只大鼠处死，提取鼠脑，以荧光分光光度法检测单胺类递质含量。后以电针干预，干预后第5d和第10d，检测条件性位置偏爱。并处死剩余大鼠，同法检测单胺递质含量。结果:第5d和第10d检测结果显示电针干预组条件性位置偏爱时间明显减少，与吗啡依赖组比较有统计学的差异（P0．05）。结论：电针能消除吗啡依赖大鼠的条件性位置偏爱效应，究其防止复吸的神经生物机制可能与电针调节脑内单胺类递质有关。
关键词 吗啡复吸 电针 单胺递质 条件性位置偏爱 大鼠 脑组织
对海洛因依赖的治疗关键是脱毒后的复吸预防。复吸的生物学原因研究显示：药物渴求、稽延性戒断症状和焦虑症状是导致复吸的主要的生物学因素。既往的研究提示戒断后5-HT的大量释放是产生戒断后焦虑的生物学原因；DA是心理渴求形成过程中起主要作用的神经递质，5-HT和NE在调节情绪和行为活动中呈现对立统一的关系［1-2］。本试验选择建立CPP模型，观察电针是否有消除吗啡依赖大鼠条件性位置偏爱效应，同时检测大鼠脑内单胺递质的变化，以探讨电针防止吗啡依赖大鼠复吸是否与影响脑内单胺递质的变化有关。
1 材料和方法
1．1 实验动物：清洁级雄性Sprague-Dawley（SD）大鼠，体重200～250g，由温州医学院试实动物中心提供。实验前在安静的室温下适应性饲养1周，自由摄食、饮水，自然昼夜节律光照。
1．2 药物和试剂：盐酸吗啡注射液（沈阳第一制药厂制造），1ml/支，内含盐酸吗啡10mg，批号：辽卫药准字（2006）第060205号。去甲肾上腺素(NE)，多巴胺(DA)，5-羟色胺(5-HT)(购于Sigma公司，分析纯)。
1．3 设备及仪器：荧光分光光度计RF-5301PC(日本，岛津公司)；美国Beckman离心机；KWD-808Ⅱ多功能智能电针仪。
1．4 条件位置偏爱箱：条件位置偏爱箱根据文献制作［3］，箱体由两个30cm×30cm×30cm正方体加上中间一个30cm×30cm×5cm的通道组成。正方体与中间通道之间有可以活动的隔板，隔板抽起后，大鼠可以在两个箱体间自由活动。箱体的一侧为黑色，箱底制成粗糙面；另一侧为白色，箱底制成光滑面。整个试验箱有视觉和触觉两种线索。
1．5 条件位置偏爱模型建立和测试：大鼠领回后适应性饲养2d，第3d进行预观察。将大鼠放入条件位置偏爱箱中间小隔，逐只观察15min。以头部两耳尖连线过箱体边缘为准,纪录大鼠停留的时间。对某一侧箱体有偏爱者则予以剔除。将大鼠30只随机分为正常对照组、吗啡依赖组和电针干预组，每组10只。吗啡依赖组腹腔注射吗啡，电针干预组腹腔注射等容量生理盐水。给药后随机放入黑箱或白箱，并对关箱的大鼠作标记，关闭1h。2h后再分别给吗啡依赖组以同上容量的生理盐水，电针干预组则腹腔注射吗啡，按照标记放入相反的箱中，同样关闭1h。吗啡剂量最初为5mg/kg，每次递增5mg/kg，1日2次（8∶00、17∶00）。吗啡依赖组、电针干预组中的标记大鼠在注射吗啡后始终关入与注射生理盐水相反的箱中。相同的方法连续给药9d，最后一次吗啡剂量为90mg/kg。第10d进行条件性位置偏爱测试。测试后将5只电针干预组大鼠固定于自制鼠架施以电针。穴位选择［4］：“后三里”、“三阴交”、“内关”和“百会”，以30号1寸毫针分别在“百会”斜刺0．5寸，双侧“后三里”、“三阴交”、“内关”直刺进针顺着经脉走向进0．3寸，不予手法刺激，使用KWD-808Ⅱ多功能智能电针仪，施以连续波，频率2Hz，电压2～4V，以大鼠能安静耐受为度（约为2mA）,留针30min，每日1次，连续10次。吗啡依赖组单纯固定鼠架不予针刺。正常对照组每次腹腔内注射生理盐水，容量每日递增，与吗啡依赖组和电针干预组吗啡容量相当，不予关闭和其他干预。在电针干预组连续针刺的第5d和第10d分别对各组大鼠进行条件位置偏爱测试。
1．6 单胺递质的测定：建模成功后，将正常对照组、吗啡依赖组和电针干预组随机选取5只大鼠作断头处死。迅速地剥取全脑，吸净血液，除去脑膜，液氮冷冻保存。取脑组织称重，放入装有3ml预冷酸性丁醇溶液中匀浆，将匀浆液转置具塞刻度玻璃离心管内，再补足正丁醇至10ml，离心10min/3000rpm，收取上清液。分别吸取每个样品的上清液15ml和1ml供测定NE、DA和5-HT使用，其中每个样品均需做样品管和内标管(样品+标准品)，每批实验需做一个空白管(荧光灭活管)和外标管(只含标准品)，再按有关方法用荧光分光光度计进行荧光检测［5］。发射光(Em)、激发光(Ex)分别为：480nm/385nm：用来测定NE；375nm/325nm：用来测定DA；480nm/365nm：用来测定5-HT。电针干预10d后将剩余大鼠作断头处死，测脑内NA、DA、5-HT，方法如上所述。
1．7 统计学分析：实验结果中偏爱时间以均数±标准差（x±s）表示，3组总体比较统计方法为方差分析，组间比较用q检验。
2 结果
2．1 条件性位置偏爱测试结果：具体结果见表1。建模前各组偏爱时间无统计学意义（P>0．05），建模后偏爱时间有统计学的差异（P0．05）。
2．2 荧光分光光度法测定脑部分神经递质含量变化：建模成功后，正常对照组、吗啡依赖组和电针干预组大鼠脑组织单胺递质NE、DA、5-HT含量比较，具有统计学意义(�P�0．05）；分别与正常对照组比较，具有显著性差异(�P�0．05)。说明条件位置偏爱试验建模成功后，大鼠脑内单胺递质NE、DA、5-HT含量会增加，而电针干预可使其含量降低，见表2。
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3 讨论
本实验以电针作为干预措施，选取大鼠百会、内关、后三里、三阴交等穴位为电刺激点，结果表明上述穴位电针能控制吗啡依赖大鼠的条件性位置偏爱。所选择的4个穴位分别与人体的百会、内关、足三里、三阴交穴相应。是针刺文献治疗戒断综合征的临床常用特效穴。
条件性位置偏爱试验是上世纪80年代发展起来的继自身给药和药物辨别实验之后逐渐成为对药物依赖动物进行精神依赖性评定最方便、最常用的实验。它反映动物物质依赖后戒断时对精神活性物质的渴求，而出现焦虑的症状。条件性位置偏爱形成的神经生物学机制此前已有大量的研究报道，脑内神经递质DA和中脑边缘多巴胺通路对于药物的位置偏爱形成有重要的作用［6-7 ］。戒断后5-HT、DA、NE三大系统的互相作用的失调，可能是觅药行为和药物戒断后发生焦虑情绪而导致复吸的最根本的神经生物学机制［3］。近来最新研究关注到一种具有产生焦虑的内源性焦虑物质――苯甲二氮卓结合抑制因子（diazepam binding inhibitor，DBI）［6-7］。DBI属于抑制性的神经递质，位于γ-氨基丁酸（GABA）能神经元突触囊泡中［8-9］。DBI具有产生焦虑的作用，故在焦虑性障碍的发病机制和精神活性物质依赖戒断后焦虑症状产生机制的研究中受到重视。
本研究显示吗啡依赖大鼠戒断后脑内NE、DA、5-HT含量与正常对照组大鼠比较有明显增高趋势；而进行电针干预后电针干预组大鼠的单胺递质含量低于吗啡依赖组，差异均有统计学意义（�P�［10］。DBI的作用可由GABA受体调控，被认为作为一种重要的内源性神经调质，诱发焦虑和行为改变，其DBI的含量可随着焦虑发生而增加。焦虑是药物依赖后精神依赖的一个普遍症状，也是复吸的重要原因，由于不同药物依赖所致的戒断综合征，其临床表现具有相似性，提示药物依赖在形成中具有共同的生化过程, 5-HT、DA、NE三大系统失调和DBI表达增加最终致戒断性焦虑的形成也具有共通的生化机制。由此推测电针干预大鼠吗啡依赖，控制焦虑，防止复吸的神经生物学机制可能是由5-HT、NE、DA系统介导的，导致内源性焦虑物质DBImRNA表达减少。具体的细胞内信号传导有待进一步的深入研究。
4 参考文献
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［10］李莎莎,康林,吴滨,等.电针对吗啡依赖大鼠条件性位置偏爱效应的作用研究［J］.四川大学学报(医学版),2004,35(6):824-827.
收稿日期 2007-01-16
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