糖浆剂和合剂中防腐剂限量检查方法的研究??
时间：2021-01-22 22:10:14 来源：达达文档网 本文已影响 人 
冯海青 邹君 杜艳 刘明军 谢军涛
摘 要：目的：建立糖浆剂、合剂中苯甲酸、山梨酸、羟苯甲酯、羟苯乙酯、羟苯丙酯和羟苯丁酯的限量检查方法。方法：采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱（5μm 4.6×250mm）;以甲醇为流动相A，0.02mol/L醋酸铵（加入0.2%甲酸）-甲醇（85：15）为流动相B梯度洗脱，流速1.0ml·min-1，柱温40℃，二极管阵列检测器，检测波长228nm、256nm。结果：方法专属性好;10小时内各成分有较好的稳定性。结论：建立的检测方法简单、准确，能满足糖浆剂、合剂中常用防腐剂限量检查的要求。
关键词：HPLC;糖浆剂;合剂;苯甲酸;山梨酸;羟苯甲酯;羟苯乙酯;羟苯丙酯;羟苯丁酯
糖浆剂和合剂是药物以一定形式分散于液体介质中所制成的供口服的液体分散体系。具有分散度大，吸收快;易于分剂量，服用方便;减少某些药物的刺激性等优点。是应用广泛的制剂类型。糖浆剂和合剂可能由于制剂和使用过程引入污染源，加入防腐剂是最为方便有效的措施。然而超量使用防腐剂存在中毒、致癌等健康风险，中国药典2015版四部制剂通则中糖浆剂和合剂明确规定了苯甲酸和山梨酸用量不得过0.3%，羟苯酯类用量不得过0.05%[1]。本方法旨在采用高效液相色谱法限量检测糖浆剂和合剂中的苯甲酸、山梨酸、羟苯甲酯、羟苯乙酯、羟苯丙酯和羟苯丁酯。
1 仪器与试剂
高效液相色谱仪：Thermo Ultimate3000;对照品苯甲酸（北京坛墨质检科技有限公司，批号A1707298）、山梨酸（中国食品药品检定研究院，批号190126-201501）、羟苯甲酯（中国食品药品检定研究院，批号100278-201404）、羟苯乙酯（中国食品药品检定研究院，批号100847-201203）羟苯丙酯（中国食品药品检定研究院，批号100444-201403）、羟苯丁酯（中国食品药品检定研究院，批号110792-200503）;甲醇为色谱纯，水为重蒸水，其余试剂为分析纯;阴性样品由实验室自制;样品来源于本所日常检验之样品。
2 方法与结果
2.1 混合对照品溶液的制备
精密称取苯甲酸、山梨酸、羟苯甲酯、羟苯乙酯、羟苯丙酯和羟苯丁酯对照品，加流动相B制成每1ml分别含苯甲酸60μg、山梨酸60μg、羟苯甲酯10μg、羟苯乙酯10μg、羟苯丙酯10μg、羟苯丁酯10μg的混合对照品溶液。
2.2 供试品的制备
精密量取样品1ml，加浓盐酸200μl振摇后用乙醇定容至50ml，振摇后静置，取上清液过0.45μm滤膜滤过，取续滤液，即得。
2.3 色谱条件
色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱（5μm 4.6×250mm）;流动相：以甲醇为流动相A，0.02mol/L醋酸铵（含0.2%甲酸）-甲醇（85∶15）为流动相B;按表1梯度洗脱;流速：1.0ml·min-1;柱温：40℃;检测器：二极管阵列检测器;检测波长：228nm、256nm;进样量20μl。
2.4 专属性考察
取样品和阴性样品，按2.2项下方法处理。分别取混合对照品溶液、样品溶液和阴性对照样品20μl注入高效液相色谱仪，照2.3项下色谱条件检测。从色谱图可见该方法的专属性较好，色谱图见图1、2。
2.5 检测限考察
以对照品溶液进样，信噪比为3∶1时的确定进样量4ng为检测限。
2.6 稳定性考察
取对照品溶液，分别在0、2、4、6、8、10小时时测定其峰面积，结果表明在10小时内各成分有较好的稳定性，结果见表2。
2.7 样品限量检查
取本所日常检验之19批次样品按2.2项下处理，按2.3项下方法检测限量，检测结果根据中国药典2015版四部制剂通则中糖浆剂和合剂限量规定判定，实验结果见表3。
3 讨论
3.1 色谱条件的选择
检测波长：考虑苯甲酸、山梨酸、羟苯甲酯、羟苯乙酯、羟苯丙酯和羟苯丁酯最大吸收波长差别较大且山梨酸、羟苯甲酯、羟苯乙酯、羟苯丙酯和羟苯丁酯最大吸收波长时苯甲酸响应值较小不适宜计算，综合考虑选择双波长（228nm、256nm）一次检测。流动相：经预试验，在流动相加入醋酸有助于改善苯甲酸、山梨酸、羟苯甲酯的峰形和分离度。将0.02mol/L醋酸铵（含0.2%甲酸）与甲醇（85∶15）预先混合的目的是为了避免醋酸铵在梯度洗脱中因为有机相变化比例太大对仪器和色谱柱造成影响。流动相的梯度比例和时间是经过大量的预试验最终确定的，主要是考虑大部分样品在前20分钟有大量的杂峰出现以及让山梨酸和羟苯甲酯达到最佳分离度，而本研究过程中的难点也是山梨酸和羟苯甲酯的分离度。
3.2 小结
采用本方法检测本单位日常抽检之样品，19批次中竟有15批次防腐剂用量超出限量，而中国药典2015年版只对糖浆剂和合剂中防腐剂使用种类和用量做出了限制性规定，却没有提供法定的检测方法，给目前的检测工作带来极大困扰。本方法在参考其他现行行业标准[2，3]的基础上采用HPLC梯度洗脱的方法将糖浆剂和合剂中的限定使用的6种防腐劑成功分离，经验证专属性、耐用性好，检出限满足限量要求，适用于日常检验工作，为糖浆剂、合剂及其他液体制剂生产过程中质量控制和产品检测提供了方法。
参考文献
[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典2015年版四部[M].北京：中国医药科技出版社，2015.
[2] 中华人民共和国国家标准.GB 5009.28-2016，食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的测定[S].
[3] 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准.SN/T 1121-2002，中药制剂中苯甲酸、山梨酸和对羟基苯甲酸酯类防腐剂的检验方法[S].
