玛瑙膏质量标准研究
时间：2021-02-03 20:00:08 来源：达达文档网 本文已影响 人 
李筱婧 韦英杰 汪晶 许欢 黄一平 江阿古丽·艾山 陈斌
[摘要] 目的 建立玛瑙膏的质量标准。
方法 采用薄层色谱法对制剂中五灵脂、延胡索、大黄、补骨脂、三七进行定性鉴别;采用高效液相色谱法对制剂中延胡索乙素进行含量测定，以乙腈-0.1%磷酸三乙胺体系为流动相，梯度洗脱，柱温30℃，检测波长280 nm。
结果 薄层色谱法斑点清晰，分离度好，阴性无干扰;延胡索乙素在2.022～20.22 μg/mL（r = 0.9999）范围内呈良好的线性关系，平均加样回收率为100.27%（RSD = 2.39%）。
结论 本研究建立的方法稳定性、重复性好，可用于玛瑙膏的质量控制。
[关键词] 玛瑙膏;质量标准;薄层色谱法;高效液相色谱法;延胡索乙素
[中图分类号] R927.1 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2020）07（c）-0133-04
Quality standard for Ma′nao Gao
LI Xiaojing1 WEI Yingjie1，2 WANG Jing1，2 XU Huan1 HUANG Yiping1，2 Janagul·As3 CHEN Bin1，2
1.The Third Clinical Medical College， Nanjing University of Chinese Medicine， Jiangsu Province， Nanjing 210028， China; 2.Key Laboratory for Traditional Chinese Medicine Drug Release System Under State Administration of Traditional Chinese Medicine， Jiangsu Province Academy of Traditional Chinese Medicine， Jiangsu Province， Nanjing 210028， China; 3.Xinjiang Yili Kazak Autonomous Prefecture Hospital of Traditional Chinese Medicine， Xinjiang Uygur Autonomous Region， Yining 835000， China
[Abstract] Objective To establish a quality control method for Ma′nao Gao. Methods Thin layer chromatography was applied to the qualitative identification of Faeces Togopteri， Corydalis Rhizoma， Rhei Radix et Rhizoma， Psoraleae Fructus， Notoginseng Radix et Rhizoma. High performance liquid chromatography was used for the content determination of tetrahydropalmatine， acetonitrile-0.1% triethylamine phosphate system was used as the mobile phase of gradient elute. The column temperature was 30°C and the detection wavelength was set at 280 nm. Results Thin layer chromatography spots was clear， which had good resolution without interference. Tetrahydropalmatine had good linear relationship with the range of 2.022-20.22 μg/mL （r = 0.9999） respectively， the average recovery was 100.27% （RSD = 2.39%）. Conclusion The method is reliable with good stability and good repeatability， and can be used for quality control of Ma′nao Gao.
[Key words] Ma′nao Gao; Quality standardization; Thin layer chromatography; High performance liquid chromatography; Tetrahydropalmatine
哈薩克民族医药是中国民族医药体系中重要的组成部分，哈萨克医药秘方玛瑙膏是外敷治疗外伤性肿痛的“明珠”，由五灵脂、延胡索、大黄等11味药材组成，主要用于治疗跌打损伤、四肢疼痛等血瘀症和痹证，具有消肿止痛、活血化瘀、行气消肿、促进骨愈合的作用，效果明确。江阿古丽等[1]通过抗炎镇痛动物实验研究，发现玛瑙膏对实验性肿痛有明显的治疗作用，表现出显著的抗炎效果。此外，还进行了玛瑙膏外敷治疗骨与软组织损伤的临床研究[2]，对外伤致骨及软组织损伤患者于治疗前后进行病情评分分析，结果显示，玛瑙膏对外伤性肿痛的消肿止痛作用明显优于对照组（P < 0.001）。哈药玛瑙膏目前暂无质量标准，为适应民族药医院制剂制造规范化、标准化，以确保临床疗效及用药安全，本试验进行玛瑙膏质量标准研究，建立玛瑙膏中五灵脂、延胡索、大黄、补骨脂、三七的薄层色谱鉴别方法及延胡索乙素的高效液相色谱法（HPLC）含量测定方法。
2.2.7 精密度试验 精密吸取浓度为12.132 μg/mL的延胡索乙素对照品溶液，按照“2.2.1”项下色谱条件连续进样6次，记录峰面积，测定值的RSD为0.088%，结果提示精密度良好。
2.2.8 重复性试验 取批号为20190724的玛瑙膏样品，按“2.2.3”项下方法制备6份供试品溶液，照“2.2.1”项下色谱条件进行测定，记录峰面积计算含量。6份样品测定值的RSD为2.32%，结果提示本法重复性良好。
2.2.9 稳定性试验 精密吸取同一供试品溶液，按照“2.2.1”项下色谱条件，于0、2、4、8、12、24 h时测定其峰面积并计算RSD为2.16%，结果提示供试品溶液在24 h内稳定性良好。
2.2.10 加样回收率试验 取批号为20190724的玛瑙膏样品10 g，共9份，精密称定，分别按已知含量的80%、100%、120%加入对照品，按照“2.2.3”项下方法制备供试品溶液，按“2.2.1”项下色谱条件进行测定，计算含量，得延胡索乙素的加样回收率均在95%～105%之间，平均回收率为100.27%，RSD为2.39%，结果见表1，提示该方法回收率良好。
2.2.11 样品含量测定 取3批玛瑙膏样品，精密称定，按照“2.2.3”项下方法制备供试品溶液，按照“2.2.1”项下色谱条件进样测定，计算延胡索乙素含量，测定结果显示，批号为20190724、20190725、20190726的延胡索乙素含量分别为25.15、25.80、25.23 μg/g。
3 讨论
本试验中薄层色谱法结果显示，供试品色谱在与对照药材色谱或对照品色谱相应的位置上显相同颜色斑点，阴性样品均无干扰。薄层色谱法供试品处理方法参照2015年版《陕西省药材标准》[3]与2015年版《中国药典》一部[4]方法，但由于制剂所含化学成分较多，部分药味薄层色谱图上斑点过多，影响分离与鉴别，增加纯化步骤费时繁琐，样品耗费量大，故改用石油醚超声处理样品。经石油醚提取所得供试品，成分少，薄层色谱背景浅，适用于五灵脂及补骨脂薄层色谱法。本试验中所有薄层色谱法方法均已对薄层层析硅胶板品牌、展开剂、温度、湿度、点样量进行了耐用性考察，结果发现在不同色谱条件下均能实现较好的分离。
本试验建立了玛瑙膏中延胡索乙素的HPLC含量测定方法，延胡索为玛瑙膏中君药之一，其活性成分延胡索乙素与本方活血止痛等功效起到了主导作用。由于该制剂由11味药材与炼蜜制成，其所含化学成分繁复，参考生物碱提取的相关文献[21-22]，考察甲醇、乙醇、80%甲醇及浓氨-甲醇四种提取溶剂，以及超声、回流两种提取方式。经过一系列预试验，最终确定以浓氨-甲醇（1∶20）混合溶液为提取试剂，加热回流后经中性氧化铝柱纯化得到供试品溶液。流动相考察了不同比例甲醇-0.1%磷酸三乙胺和乙腈-0.1%磷酸三乙胺等度洗脱，分离度差，而“2.2.1”项下梯度洗脱的色谱条件分离效果良好。在HPLC含量测定时，通过全波长扫描发现延胡索乙素在280 nm处有较大吸收，且无阴性干扰，参考药典及其他文献，最终选择280 nm为检测波长。
[参考文献]
[1] 江阿古丽，吾古丽汗，康雄，等.哈萨克药玛瑙膏抗炎镇痛作用的实验研究[J].中国民族医药杂志，2006（2）：28-29.
[2] 江阿古丽·艾山，江安努尔·这依肯，古丽孜哈·哈布什，等.玛瑙膏外敷治疗骨与软组织损伤的临床研究[C]//2016《中国组织化学与细胞化学》杂志临床研究研讨会论文汇编，2016.
[3] 陕西省食品药品监督管理局.陕西省药材标准[M].西安：陕西科学技术出版社，2015.
[4] 国家药典委员会.中国药典[S].一部.北京：中国医药科技出版社，2015.
[5] 程巧鸳，郑成，郑瑜倩，等.小儿热速清颗粒质量标准研究[J].医药导报，2017，36（3）：321-325.
[6] 吴小斌.三黄益肾颗粒的药学研究[D].广州：广州中医药大学，2017.
[7] 曹建华.用硅胶G板对健儿强身膏中的补骨脂﹑陈皮﹑续断进行薄层色谱鉴别的价值[J].当代医药论丛，2019， 17（3）：197-199.
[8] 李祥溦，吕新林，李紫阳，等.盐补骨脂饮片标准汤剂分析研究[J].中国中药杂志，2019，44（10）：2078-2083.
[9] 李万红.五藤胶囊的薄层色谱定性鉴别及其补骨脂素HPLC定量研究[J].西部中医药，2015，28（6）：25-29.
[10] 温馨，江耀伦，陈素珍，等.大七厘散中大黄及当归薄層色谱鉴别方法改进[J].中国药业，2017，26（14）：7-9.
[11] 赵振霞，王敏，王钰宁，等.心可舒丸中三七的薄层色谱鉴别和6种物质的含量测定[J].华西药学杂志，2016， 31（6）：656-659.
[12] 张红星.红花接骨丸中三七、血竭薄层色谱鉴别研究[J].中国民族民间医药，2013，22（9）：13.
[13] 陈娇.三七跌打损伤软膏的药学研究[D].成都：成都中医药大学，2017.
[14] 张丹，王昌利，卜雕雕，等.高效液相色谱法同时测定延胡索中5种生物碱含量的方法学研究[J].中南药学，2018， 16（12）：1759-1762.
[15] 邓磊，和明伟，侯连兵.HPLC-CAD法同时测定元胡止痛胶囊中6种生物碱及香豆素类成分的含量[J].中南药学，2019，17（1）：88-92.
[16] 胡锦祥，吴瑾瑾，王群星，等.大孔吸附树脂纯化延胡索总生物碱工艺研究[J].中草药，2018，49（18）：4302-4310.
[17] 任彬.UPLC法测定木丹颗粒中延胡索乙素的含量[J].海峡药学，2018，30（10）：54-56.
[18] 吴芸，陈志鹏，肖璐，等.延胡索乙素平衡溶解度及表观油水分配系数的测定[J].南京中医药大学学报，2012， 28（2）：178-180.
[19] 徐汇，霍艳萍，高晓艳.HPLC法测定腰痹通胶囊中延胡索乙素的含量[J].世界最新医学信息文摘，2017，17（83）：72-73.
[20] 黄涛，刘丽，张笑敏，等.夏天无HPLC指纹图谱及多指标含量测定研究[J].中草药，2019，50（10）：2474-2479.
[21] 王欢，毕福钧，林彤，等.延胡索HPLC指纹图谱研究及9种生物碱含量测定[J].中药材，2017，40（3）：624-629.
[22] 吕子明，刘文娟，于向红，等.大孔吸附树脂纯化延胡索总生物碱工艺研究[J].中国医药导报，2012，9（20）：109-112.
（收稿日期：2019-11-25）
