六味地黄浓缩丸 高效液相色谱法测定六味地黄浓缩丸中马钱苷的含量
时间：2019-01-11 04:23:27 来源：达达文档网 本文已影响 人 
[摘要]目的：建立测定六味地黄浓缩丸中马钱苷含量的方法。方法：采用高效液相色谱法，色谱柱为Hypersil ODS-2（150 mm×4.6 mm, 5 μm）；以乙腈为流动相A，以0.05%磷酸溶液为流动相B；流速1 ml/min；检测波长为236 nm；柱温30℃。结果：马钱苷在0.040～2.002 μg 范围内具有良好线性关系（r =0.999 9），平均回收率为100.0%，RSD为1.65%。结论：本法准确可靠，简便迅速，适用于测定六味地黄浓缩丸中马钱苷的含量。
[关键词] 六味地黄浓缩丸；马钱苷；高效液相色谱法
[中图分类号] R927.2[文献标识码]A [文章编号]1673-7210（2008）12（b）-005-02
Determination of loganin in Liuweidihuang Pills by HPLC
LIANG Fa-hua1,CHEN Jie2
( 1.The People′s Hospital of Luoding ,Guangdong Province, Luoding527200, China; 2. Guangdong Luoding Pharmaceutic Co.Ltd., Luoding527200, China)
[Abstract] Objctive: To establish a method for content determination of loganin in Liuweidihuang Pills. Methods: HPLC methods was used, the Hypersil ODS-2(150 mm×4.6 mm, 5 μm) was used, mobile phase A was acetonitrile, mobile phaseB was 0.05% of phosphate acid, and the flow rate was 1 ml/min. The detective wavelength was set at 236 nm with column temperature at 35℃. Results: The calibration curve was linear for loganin at the range of 0.040-2.002 μg(r =0.999 9).The average recovery was 100.0%，RSD was 1.65%. Conclusion: The method is reliable, accurate, simple and rapid, it can be used for determination of loganin in Liuweidihuang Pills.
[Key words] Liuweidihuang Pills；Loganin；HPLC
六味地黄浓缩丸收载于部颁药品标准[1]，其有效成分测定方法为薄层扫描法测定方中主药山茱萸中的熊果酸含量，专属性不强，本文采用高效液相色谱法测定山茱萸中马钱苷含量，方法准确、可靠、专属性强，现报道如下：
1仪器与试药
1.1仪器
SHIMADZU LC-10ATVP型高效液相色谱仪；Hypersil ODS-2 （150 mm×4.6 mm，5 μm）色谱柱；TU-1800型紫外可见分光光度计(北京普析)。
1.2试药
马钱苷对照品（批号：110640-200502，中国药品生物制品检定所）；六味地黄丸浓缩丸（批号为：070301、070302、070303，广东罗定制药有限公司）；乙腈（色谱纯），重蒸馏水，甲醇（分析纯）。
2方法与结果
2.1 色谱条件
2.1.1 色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以0.05%磷酸溶液为流动相B，按表1中的规定进行梯度洗脱；柱温为30℃；检测波长为236 nm。理论板数按马钱苷峰计算应不低于4 000。
在此条件下马钱苷对照品和制剂中的其他组分均能达到良好分离,阴性对照色谱不干扰马钱苷的测定，测定时，分别取供试液、马钱苷对照品溶液、空白对照液各10 μl注入液相色谱仪,记录色谱图,结果见图1。
2.2溶液的配制
2.2.1供试品溶液的制备 取六味地黄浓缩丸，研碎，取约1 g，精密称定，置于50 ml容量瓶中，加入甲醇40 ml，密塞，超声处理（功率250 W，频率33 kHz）50 min，放冷，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
2.2.2 对照品溶液的制备取马钱苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 ml含20 μg的溶液，即得。
2.2.3阴性对照液的制备按处方取缺山茱萸的其他药材依法制成阴性样品，再依“2.2.1”项下方法制成阴性样品溶液，作为阴性对照液。
2.3 线性关系的考察
精密称取马钱苷对照品10.01 mg，置于50 ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度摇匀，得对照品贮备液（200.2 μg/ml），精密吸取上述溶液适量配制成浓度分别为4.004，8.008， 20.020，40.040，80.080， 200.200 μg/ml对照品溶液，按测定方法各进样10 μl, 进行测定，以进样量（μg）为横坐标，峰面积为纵坐标，得回归方程Y=1 367 207X+1 049，相关系数r =0.999 9，表明马钱苷进样量在0.040～2.002 μg范围时与峰面积有良好的线性关系。标准曲线见图2。
2.4回收率试验
取已知含量的本品（批号：070301，含量为：0.99 mg/g）共9份，分别精密加入马钱苷对照品溶液（0.339 2 mg/ml）1 ml、2 ml和3 ml，按上述供试品溶液制备方法制得高、中、低3种浓度的供试品溶液。分别吸取供试品溶液10 μl，注入液相色谱仪，测定马钱苷的含量，计算回收率，平均回收率为100.0%, RSD为1.65%，结果表明回收率良好。
2.5 精密度试验
2.5.1 重复性试验取本品（批号：070301），按上述含量测定的方法，取样量分别为标准的50%、100%、300%，各取3份，共9份，制得供试品溶液。分别吸取供试品溶液10 μl，注入液相色谱仪，测定并计算,结果马钱苷含量的RSD为1.32%，表明重复性良好。
2.5.2中间精密度试验取本品（批号：070301），按上述含量测定的方法，在不同的时间，由3个不同人员，各取样2份，共取样6份，分别测定取样品含量，结果马钱苷含量的RSD为1.85%，表明中间精密度良好。
2.6稳定性试验
取上述马钱苷对照品溶液及六味地黄浓缩丸供试品溶液（批号070301），分别于0，2，4，8，16，24 h各进样10 μl测定峰面积，在24 h内，对照品溶液和供试品溶液峰面积基本一致，RSD分别为0.58%和0.61%。表明马钱苷对照品溶液及六味地黄浓缩丸供试品溶液在24 h内稳定。
2.7样品含量测定
本品自取得批文以来，一共生产了3批（070301、070302、070303）产品，按测定方法分别测定这3批产品的含量，结果见表2。
3讨论
3.1 检测波长的选择
取马钱苷对照品适量，以流动相[乙腈-0.05%磷酸(10∶90）]作为溶剂，配制成对照品溶液，在200～310 nm波长范围内进行扫描，结果马钱苷在236.80 nm波长处有强吸收，结合资料[2]，选定236 nm为检测波长。
3.2 提取方法的选择
试验过程中，对比了不同超声提取时间对样品含量测定结果的影响,对样品分别超声提取30，40，50，60，70 min, 试验结果显示，超声处理（功率250 W，频率33 kHz）50 min时能更有效地提取马钱苷成分，因此确定采用超声处理50 min作为提取时间。
3.3流动相的选择
参考资料[2]采用的流动相比例，以乙腈-0.05%磷酸（11∶89）先进行试验，结果马钱苷峰与后面的一个峰分离度只有1.071,未能完全分离，将流动相比例调整为乙腈-0.05%磷酸（10∶90），结果供试品溶液图谱中马钱苷的保留时间、理论塔板数、拖尾因子、前后峰的分离度等各项参数均符合规定，但在45 min处仍有杂质峰洗出，因此，采用梯度方式进行洗脱，以加快分析速度，经多次试验，确定文中的最佳梯度系统。
[参考文献]
[1]卫生部药典委员会.卫生部药品标准[S].中药成方制剂第十一册.1998.36
[2]国家药典委员会.中华人民共和国药典[S].一部.北京:化学工业出版社,2005.556-557.
（收稿日期：2008-08-07）
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