滤纸干血片保存方式对产前筛查标志物检测结果的影响
时间：2020-10-27 14:28:51 来源：达达文档网 本文已影响 人 
王莉 王青 随瑞枝 宋旭梅 马菊梅 刘燕翔 张翠霞 芮淑贤
[摘要]目的：探讨产前筛查滤纸干血片标本保存时间和保存条件对AFP、Freeβ-HCG检测结果的影响。方法：采集50例孕妇血样，每例均制备两份滤纸干血片标本，每一份上面包括3个血斑。一组29C～8C冷藏;另一组室温20°C～25°C保存。分别在保存第2d、7d、14d时，用TALENT-II半自动时间分辨荧光免疫分析仪检测AFP、Freeβ-HCG。结果：室温组和冷藏组在2d、7d、14dAFP和Freeβ-HCG检测结果比较，差异无统计学意义，AFP和Freeβ-HCG冷藏组在2d、7d、14d的结果差异无统计学意义。AFP和Freeβ-HCG室温组在2d、7d、14d的结果差异无统计学意义。结论：滤纸干血片标本在冷藏2°C～8C、室温20°C～25°C均可稳定保存至14d。开展筛查时应注重标本保存条件和运输时间，确保标本质量和筛查结果的准确性。
[关键词]滤纸干血片法;产前筛查;时间;温度
中图分类号：R394
文献标识码：A
文章编号：2095-5200（2019）02-041-04
DOI：10.11876/mimt201902011
中孕期唐氏综合征（DS）血清学产前筛查的常用标志物包括甲胎蛋白（AFP）.游离β人类绒毛膜促性腺激素（Freeβ-HCG）、游离雌三醇（uE3）和抑制素A（InhA）。血清标本应在49C～8C保存，不超过7d"。AFP为相对稳定的蛋白类物质，HCG相对不稳定，血清标本静置的时间和温度（室温、37C）对结果影响很大。分离后的血清在49C～8C条件下可稳定保存1周，远距离运输时应有冷链系统，保证保存环境B。产前筛查机构和采血机构不在同一医疗机构时，需要先分离出血清再保存、运送，运输距离和保存条件不达标导致边远地区的孕妇不能进行产前筛查，影响了产前筛查的大规模开展。干血斑法最早于1963年首次用于代谢性疾病的大规模筛查，后应用于新生儿疾病的筛查。其具有成本低廉、血样采集方法简单、减少溶血和样本降解、不需要离心、在高温情况下稳定、减少了运输和储存费用等优势。滤纸干血片技术应用于产前筛查领域是一项比较新的技术。已有文献报道显示同一孕妇血清学法和干血片法两种检测方法有很好的相关性，检测AFP、Freeβ-HCG结果差异无统计学意义，提示血清法和滤纸干血片两种方法有很好一致性。
为确保检验前标本质量及检测结果的准确性，就有必要对产前筛查滤纸干血片标本的保存时间及保存条件对AFP和Freeβ-HCG含量影响进行探讨。相比已有报道，本研究延长了保存时间、扩大了保存温度范围，进一步研究时间和温度对标本的影响。
1对象与方法
1.1研究对象
50例孕15+6～20*周中孕期孕妇，单胎，取得其产前筛查的知情同意后，进行血清学唐氏筛查时同时制备干血片标本。
1.2滤纸干血片法仪器和试剂
TALENT-II半自动时间分辨荧光免疫分析仪;FWZ-I型微量振荡器;DEM-3自动洗板机;打孔器;配套试剂AFP试剂盒（批号：20160706）;Freeβ-HCG试剂盒（批号：20160706）。
1.3标本采集
每例孕妇采集1管静脉血液标本，采集标本的容器为干燥真空采血管、不含任何添加剂，采样量为3～5mL。采集后，每份静脉血标本再用移液器吸取制备两份滤纸干血片标本（注：每一份上面包括3个血斑。制备过程需快，以防血液凝集。每个血斑血量50uL，直径8mm，两面渗透，无重叠，室温干燥2h后，将两份分别放人两个干燥避光密封袋内。实验滤纸片采用广州丰华生物科技有限公司提供的产前筛查采血卡），剩余i血液3000r/min，离心10min，分离血清，2°C～8°C保存待检测。
1.4分组检测
按不同的保存条件分为冷藏组、室温组。将滤纸干血片标本放入干燥避光密封袋内，一组2°～8C冷藏;另一组室温20°C～25C保存。分别在保存第2d、7d、14d时，用TALENT-II半自动时间分辨荧光免疫分析仪采用DELFIA法检测AFP、Freeβ-HCG。
1.5统计方法
分析软件SPSS22.0软件包，相同保存时间不同保存条件样本检测结果比较，采用t检验;相同保存条件不同保存时间样本检测结果比较，采用F检验，P<0.05为差异有统计学意义。
2结果
2.1不同保存条件对干血片中AFP、Freeβ-HCG含量的影响
室温组和冷藏组在2d、7d、14dAFP和Freeβ-HCG检测结果比较，差异无统计学意义，见表1。
2.2保存天数对干血片中AFP、Freeβ-HCG含量的影响
如表2所示，AFP冷藏组在2d、7d、14d的结果进行F检验，F=1.894，P=0.155>0.05，差异无统计学意义。AFP室温组在2d、7d、14d的结果进行F检验，F=1.184，P=0.310>0.05，差异无统计学意义。即室温保存和29C～8C保存未发现干血片中AFP含量随着时间的延长检测值发生显著变化。
如表3所示，Freeβ-HCG冷藏组在2d、7d、14d的结果进行F检驗，F=0.516，P=0.598>0.05，差异无统计学意义。Freeβ-HCG室温组在2d、7d、14d的结果进行F检验，F=0.683，P=0.507>0.05，差异无统计学意义。即室温保存和2°C～89C保存未发现干血片中Freeβ-HCG含量随着时间的延长检测值发生显著变化。
3讨论
出生缺陷指婴儿出生时就存在的身体结构、功能或代谢异常，是严重影响儿童体格生长和智力发育的疾病。出生缺陷已成为世界上婴儿死亡、儿童和成人残疾的主要原因之一。在我国，出生缺陷已经成为导致残疾的重要原因，而最常见的出生缺陷疾病为唐氏综合征（Downsyndrome，DS）、爱德华综合征（Edwardssyndrome，ES）、开放性神经管缺陷（openneuraltubedefect，ONTD）3种，这三种出生缺陷病均可在孕中期产检时进行筛查和诊断。迄今为止，染色体异常还没有有效的治疗手段。提高产前筛查检测质量，扩大产前筛查覆盖的区域，降低DS等疾病婴儿出生率是所有地区卫生机构和检测机构最关注的问题。滤纸干血片标本用于产前筛查生物安全性高，标本易保存、易运送、方便快捷，更适合大规模开展筛查工作。
干血片有便于采集、便于转运、经济适用、易于保存等优点，在国外，广泛应用于遗传学，流行病学及新生儿筛查等。国内可以成功建立起新生儿疾病筛查方法和系统，也正是充分利用了干血片标本的这些优点。
文献报道AFP、Freeβ-HCG干血片法检测结果在（18C+1C）48h内检测结果无显著差异[10。也有报道AFP滤纸干血片在-20C、4°C、25C下均可保存28d，但在35°C下最长可以保存12d;Freeβ-HCG滤纸干血片在-20C及49C下均可保存28d，室温下可保存6d，35°C下最长可以保存3d179.161。还有文献报道Freeβ-HCG及AFP在血片中置4C条件下保存至少可稳定60d。AFP血片密封保存于4C时可以保存半年，室温环境37°C下可稳定保存1个月。Freeβ-HCG血片密封保存，常温下保存35d其检测水平变化在10%以内，4°C可以保持。综合以上文献，Freeβ-HCG在高温35C以上不稳定，影响了检验结果的准确性。
结合本地区特点，本研究选取了209C～25°C作为室温保存条件，结果显示：室温组与冷藏组相同保存时间检测结果比较，组间差异无统计学意义。标本中分析物在室温（20°～25C）和冷藏（2C～8C）均稳定保存。不同保存时间的检测结果比较，分析物AFP和Freeβ-HCG含量随着时间的延长检测结果未发生显著变化。滤纸干血片标本AFP、Freeβ-HCG在2C～8C、室温约20～25C均可稳定保存至少14d，与文献报道结果相符。本研究结果有一定局限性，主要是由于实验室室温相对恒定，因此产生局限性。
与血清相比，滤纸干血片法分析物在血片中更稳定，不易受环境温度和保存时间的影响。但在大规模产前筛查中可能会出现各种未知因素影响检测结果的准确性，因此，标本的运输和保存仍是分析前质量管理最关键的步骤，各基层采血机构应加强各个环节的质量控制。滤纸干血片用于产前筛查，低温保存和运输最为可靠，当不能满足低温保存时，应当尽可能将运输环境温度维持在25C以下，尽快将采集好的干血片标本送至检测机构，以确保检验结果质量，减少因检验结果不准确导致的漏诊。对于高风险孕妇，需充分告知其知情，进行胎儿羊水细胞核型分析，及时发现胎儿染色体异常，结合分子检测、细胞遗传学技术，降低出生缺陷，提高出生婴儿的健康水平。
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