木樨草素拮抗庆大霉素耳毒性实验观察_硫酸庆大霉素颗粒
时间：2019-01-11 04:27:16 来源：达达文档网 本文已影响 人 
[摘要]目的：初步了解木樨草素对庆大霉素耳毒性的影响。方法：设庆大霉素组与庆大霉素加不同剂量木樨草素（10 mg、20 mg）两组，并进行组间比较，观察听性脑干反应(ABR)阈值、眼震电图（ENG）的频率，了解其听功能及前庭功能的变化。结合耳蜗基底膜铺片琥珀酸脱氢酶（SDH）染色方法观察耳蜗形态学变化。结果：听功能检查结果显示，庆大霉素加不同剂量木樨草素组的ABR阈值明显低于庆大霉素组，经统计学处理，差异有显著性。形态学检查结果与听功能检查结果一致。前庭功能检查结果亦发现木樨草素对庆大霉素引起的前庭功能变化有拮抗作用。结论：本实验发现木樨草素对庆大霉素引起的耳蜗和前庭损伤有拮抗作用。
[关键词]木樨草素；庆大霉素；耳毒性
[中图分类号]R96[文献标识码]B[文章编号]1673-7210（2007）10（b）-085-03
Experimental study on luteolin rivalizes ototoxicity induced by gentamicin
ZHANG Jun
(The Information Service Center of Jinan Health Bureau,Jinan 250001,China)
[Abstract] Objective：To primarily find out the effect about luteolin rivalizing ototoxicity of gentamicin.Methods: In this experimental study,gentamicin group was compared to the group of gentamicin with different dose of luteolin (10 mg,20 mg).The changes in hearing and vestibule function were discovered by measuring the threshold of ABR and the frequency of ENG.The method of cochlear preparation stained with SDH was used to observe morphological changes in cochleas.Results: The auditory examination results showed that the thresholds of the group of gentamicin with different dose of luteolin were higher than the one of the gentamicin group,and the difference was significant in statistics.The morphology analysis result was consistent with auditory examination. And the vestibule function examination also proved that luteolin rivalize vestibule function changes induced by gentamicin.Conclusion: Based on the experiment,luteolin rivalize ototoxicity induced by gentamicin.
[Key words]Luteolin;Gentamicin;Ototoxicity
在植物成分中，总称为黄酮类化合物(Flavonoid)的物质是分布最广的一类酚性化合物。除了O-烷基(O-alky1)和二级取代基外，其基本骨架是由15个碳原子构成，即由2个芳香环通过3个碳原子结合而成的。这类化合物在自然界中以糖苷型和游离型存在，并以其生物化学及药理作用的多样性，包括抗氧化活性，引起了国内外学者的广泛重视，研究进展很快。木樨草素是一种很具有代表性的天然黄酮，属弱酸性四羟基黄酮类化合物，在植物界分布较广；标准程序的化学分析研究表明，木樨草素具有最强的抗氧化活性。
本实验选用木樨草素作为研究对象,旨在观察木樨草素对庆大霉素耳毒性的影响。
1 材料和方法
1.1动物分组
选用耳廓反射灵敏，健康杂色豚鼠50只，体重250～350 g。按不同药物剂量随机分为4组，庆大霉素100 mg组10只，庆大霉素100 mg+木樨草素10 mg组15只,庆大霉素100mg+木樨草素20 mg组15只。为了排除木樨草素对听功能的影响，特设木樨草素20 mg组10只豚鼠，但不参加统计。
木樨草素为Aldrich公司产品，纯度95％；庆大霉素由烟台第二制药厂生产。给药方式及时间:每日上午1次,连续肌注14 d。
1.2功能测试
1.2.1听功能时间:每组动物用药前及活杀前均行双耳听性脑干反应的阈值测试。方法:用日本三荣株式会社产的7S11信息处理机记录ABR。选交替短声（CLICK）刺激，重复率20 beats/s，平均叠加次数512，扫描时间10 ms，滤波带宽80～3000 HZ，记录电极置于颅顶，参考电极置于刺激耳垂，地线接对侧耳垂，耳机距豚鼠耳廓3 cm处。
1.2.2前庭功能测试时间:每组动物取10只在用药前、用药2周后及活杀前行ENG测试。方法:用日本光电SR-2型摆动椅及RM-6100型多导记录仪。摆动椅的峰速度为50%、幅度为90°，即以0.16 HZ、幅度90°作为刺激条件，每只动物测40 s左右，6 s为一周期，计算第2～4周期的平均眼震次数。前庭功能以平均眼震抑制率（f）为指标。
豚鼠放置在固定盒内、在清醒状态下行功能检查，全过程均以双盲法进行。
1.3形态学检查
动物于给药后14 d，进行听功能及前庭功能检查后，断头处死，动物颞骨均做耳蜗基底膜铺片。耳蜗基底膜铺片：将豚鼠断头处死，快速取出耳蜗，蜗管内灌注氯化硝基四氮唑蓝配制的瑚珀酸脱氢酶（SDH）作用液，37℃温箱内孵育60 min，10%甲醛固定液固定、脱钙、解剖显微镜下剥去耳蜗骨壳，去除螺旋韧带和前庭膜，按Stockwell等介绍的方法将耳蜗分段制备耳蜗铺片，光镜下观察内外毛细胞的排列和SDH活性并记录缺失数。
1.4 统计学处理
听功能指标用秩和检验作统计处理；前庭功能指标用t检验作统计处理。
2 结果
2.1功能测试结果
2.1.1 ABR反应阈的变化（表1）
从听功能测试结果可以看出，单独庆大霉素100 mg组在用药2周后ABR阈值升高，与庆大霉素+木樨草素10 mg和庆大霉素100 mg+木樨草素20 mg组比均有显著性差异（P庆大霉素100 mg+木樨草素10 mg>庆大霉素100 mg+木樨草素20 mg。
本文为全文原貌 未安装PDF浏览器用户请先下载安装 原版全文 2.1.2前庭功能的变化（表2）
从前庭功能测试结果可以看出，庆大霉素100 mg组、庆大霉素100 mg+木樨草素10 mg组与庆大霉素100 mg+木樨草素20 mg组的眼震抑制率比较，差异有显著性，而庆大霉素100 mg组与庆大霉素+木樨草素10 mg组眼震抑制率相比没有显著差异。说明较大剂量木樨草素庆大霉素引起的前庭功能变化有拮抗作用。
2.2形态学方面（表3）
耳蜗基底膜铺片 判断毛细胞缺失的标准：毛细胞的轮廓不清或消失，无SDH反应之蓝色颗粒沉淀。毛细胞记数从钩端开始，连续观察记录毛细胞的缺失数及各组实测外毛细胞总数。
由表3可见，庆大霉素100 mg组与庆大霉素100 mg+木樨草素10 mg组比较，差异无显著性，光镜下观察见庆大霉素100 mg+木樨草素10 mg内毛细胞的损伤程度略轻于庆大霉素100 mg组，这种表现与听功能检查的结果是相符的，具体表现为庆大霉素100 mg组1～3圈内毛细胞广泛缺失，1～3圈外毛细胞损伤严重，全部消失，仅4圈外毛细胞散在性缺失，庆大霉素100 mg+木樨草素10 mg组1～4圈内毛细胞散在性缺失，1～3圈外毛细胞损伤也很严重，仅2～3圈有个别存在，4圈外毛细胞散在。
庆大霉素100 mg组与庆大霉素100 mg+木樨草素20 mg组比较，差异有显著性，光镜下观察庆大霉素100 mg+木樨草素20 mg组1至4圈内毛细胞损伤又轻于庆大霉素100 mg+木樨草素10 mg组，呈个别缺失，钩端至2圈外毛细胞的损伤呈广泛缺失，3圈外毛细胞散在，4圈外毛细胞完好。
另外，从单纯木樨草素组可以看出，1～4圈均无损伤。
综合耳蜗基底膜铺片结果耳蜗毛细胞缺失情况, 较大剂量木樨草素对庆大霉素引起的耳蜗和前庭毒性有明显的拮抗作用。
3 讨论
木樨草素的化学名为3"，4"，5，7-四羟基黄酮(3"，4"，5，7-Tetralydroxyflanone)，化学式为C15H10O6，分子量为286.23。因最初从木樨草科(Resedaceae)木樨草属(Reseda)的草本植物木樨草(英文名Reseda，植物分类拉丁文名R．odorata L．)的叶、茎、枝中所分离出而得名，是一种天然色素组分。这种色素组分从天然植物色素化学结构分类上属于多酚(Polypheno1)类的花黄素(Antthoxanthin)亚类或称黄酮(Flavone)亚类色素；从溶解性能分类上属于水、醇溶性的染料(Dye)类色素；木樨草素已被世界权威性的英国色素化学家学会(UK.Theosociety of dyers and colourists)载入该学会编辑出版的色素索引(Colour index-CI)被命名为黄色天然色素2(Natural yellow 2)，被编为CINO.75590。
木樨草素同其他黄酮亚类色素一样，亦具有杀菌、消炎、收敛等功能。此外，尚具有维生素P(Vitamin P)的药理功能。其天然品已应用于临床，止咳、祛痰、消炎，有较好的疗效[1]。另外，有研究表明，木樨草素、槲皮素、芹黄素及它们的糖苷均具有抗感染、解痉、去痰、降血压、增强冠状动脉血流量等药理作用，近期文献进一步报道了木樨草素的抗高血压、抗癌的重要作用[2，3]。标准程序的化学分析研究表明，等摩尔浓度条件下的木樨草素与槲皮素及辣椒素相比，木樨草素具有最强的抗氧化活性。
氨基糖苷类抗生素诱导产生活性氧（ROS）是引起细胞死亡的一系列反应的开始。这一过程与铁离子有关。氨基糖苷类抗生素可与铁离子形成螯合物，与不饱和脂肪酸反应，催化生成活性氧自由基(O2・)和脂类自由基[4]。正常情况下，耳蜗毛细胞内活性氧自由基(O2・)在超氧化物酶(SOD)催化下生成过氧化氢(H2O2)，然后在过氧化氢酶作用下分解成H2O和O2。氨基糖苷类抗生素（如庆大霉素）可激活内耳组织中的iNOS，使NO生成增加。这种情况下，活性氧自由基(O2・)可与过量的NO生成有害的过氧化亚硝酸盐，或直接诱导细胞死亡
本次实验发现，豚鼠听性脑干反应（ABR）阈值在单独应用庆大霉素100 mg 2周后升高，而木樨草素可使升高的阈值降低，并呈现剂量依赖性。前庭功能实验表明，较大剂量的木樨草素对庆大霉素引起的前庭功能变化有拮抗作用。形态学检查结果与听功能检查结果一致。而单纯木樨草素组对耳蜗无损伤。本实验结果说明木樨草素对庆大霉素引起的耳蜗和前庭损伤有拮抗作用性，并与其剂量有关。而木樨草素的这种拮抗作用与其具有较强的抗氧化活性有关。
[参考文献]
[1]李敬芬,沙靖全,张义英.木樨草素Cu(Ⅱ)配合物的合成与结构表征[J].黑龙江医药科学,2003,6(6):24．
[2]姚新生.天然药物化学[M].第3版.北京:人民卫生出版社,2001.89.
[3]孙金琳.抗高血压药用植物的国外研究近况[J].国外医药・植物药分册,1995,10(6):24.
[4]Sha SH,Schacht J.Stimulation of free radical formation by aminoglycoside antibiotics[J].Hear Res,1999,128(1-2):112-118.
（收稿日期：2007-08-02）
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