[益肾活血汤对糖尿病大鼠肾功能保护作用的实验研究] 杞黄益肾口服价格敖东

　　摘 要：目的：探讨益肾活血汤对糖尿病大鼠肾功能的保护作用及其机制。方法：将雄性SD大鼠分为4组：正常对照组（A组）、低剂量组（B组）、高剂量组（C组）、糖尿病组（D组），在实验的第3周、第6周分别测定尿中微量白蛋白（mAlb）含量和β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶（NAG）活力和血清中血糖（GLU）、甘油三酯（TG）、血肌酐（SCr）、尿素氮（BUN）、糖化蛋白（GSP）丙二醛（MDA）含量及超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-P�x）活力。结果：糖尿病组大鼠首先出现尿中mAlb含量增高，随病程的进展NAG活力也开始升高。益肾活血汤可明显降低尿中mAlb含量，对NAG活力的影响不大。此方剂无明显的降血糖作用，但可明显降低TG和BUN的含量。从第3周开始，糖尿病大鼠的GSP、MDA含量明显高于正常组，而SOD、GSH-P�x活力明显低于正常组，到第6周，益肾活血汤能够降低GSP、MDA含量，提高SOD、GSH-P�x活力。结论：糖尿病大鼠在肾功能完好时，已开始出现mAlb增高，而后才出现NAG活力增高，糖尿病大鼠体内存在脂代谢紊乱、非酶糖化反应、氧化应激增强，这些是导致糖尿病肾病的原因，益肾活血汤能够通过抗脂代谢紊乱、非酶糖化反应、氧化应激增强来保护肾功能。
　　关键词：益肾活血汤；糖尿病肾病；非酶糖化；氧化应激；脂代谢紊乱
　　中图分类号：R285
　　文献标识码：A文章编号：
　　1673-7717（2008）05-
　　0993-03
　　
　　Experiment of Decoction of Benefit Kidney and Activate Blood�
　　Effects for Renal Function in Kidneys of Diabetic Rats
　　�
　　GAO Guo�li,CHE Guang�sheng,DONG Yao,SU Dan，LIU Zhi�mei，CHUI Pei�hong，JIANG Yuan，WANG Jian，XIONG Ying
　　�（
　　Vocational Technical College，Liaoning University of Traditional Chinese Medicine,Shenyang 110101,Liaoning,China
　　）
　　Abstract：
　　Objective：To assess the benefit kidney and activate blood Chinese herb effects of the renal function in kidneys of the diabetic rats and mechanism. Methods：SD rats were induced by streptozocin（STZ）to make diabetic model rats，the diabetic rats were randomly divided into four groups：normal control group（A），low dose group（B，benefit kidney and activate blood Chinese herb 18g•kg�-1•d�-1 by gavage），high dose group（C，26g•kg�-1•d�-1 by gavage），diabetic model group （D）.At week 3,6 respectively the contents of mAlb and activities of NAG in urine and the contents of blood glucose,triglycerides（TG）,serum creatinine（SCr）,blood urea nitrogen（BUN）,glycasylation products（GSP）,lipid peroxidatin（MDA）in serum and the activities of superoxide dismutase（SOD）,glutathione peroxidase（GSH-P�x） in serum were determined.Results：Before damaged of renal function in kidneys of diabetic rats ,the contents of mAlb began to increase. Benefit kidney and activate blood Chinese herb could reduce the contents of mAlb,but could not change the activities of NAG and the contents of blood glucose. Benefit kidney and activate blood Chinese herb could reduce the contents of TG from 3 weeks. The contents of GSP and MDA of diabetic rats were higher than the contents of GSP and MDA of normal rats.the activities of SOD,GSH-P�x of diabetic rats were lower than the activities of SOD,GSH-P�x of normal rats.Conclusion：The change of the renal function in kidneys of the diabetic rats begin from the contents of mAlb in urine, lipid metabolism disorder, nonenzymatic glycation，the increased oxidative stress in diabetic rats are the reasons of result in diabetic nephropathy（DN）. Benefit kidney and activate blood Chinese herb can protect the renal function in kidneys of the diabetic rats by reducing nonenzymatic glycation and oxidative stress and the contents of mAbl and improving lipid metabolism.
　　
　　Keywords：decoction of benefit kidney and activate blood；diabetic nephropathy；nonenzymatic glycation；oxidative stress；lipid metabolism disorder
　　
　　糖尿病肾病（DN）是糖尿病最严重的并发症之一，是糖尿病患者的主要死亡原因之一。发病机制与糖代谢紊乱及由此所致的非酶糖化、氧化应激、脂代谢紊乱、肾血流动力学改变、蛋白激酶C激活等多种因素有关[1-3]。
　　中医认为本病病机多为脾肾两虚、精微不固、痰瘀互阻。治疗原则为补益脾肾、固精、活血化瘀。治疗中注重健补脾肾、益气行血[4]。本实验应用益肾活血汤作用于糖尿病大鼠，观察此中药对糖尿病大鼠肾功能的保护作用及其机理。�
　　
　　1 材 料
　　
　　实验动物：由沈阳医学院动物室提供，为清洁级雄性SD大鼠，月龄3个月，体重200～250g，恒温22℃，相对湿度60％～70%环境下适应性喂养1周后，进行实验。
　　益肾活血汤的制备：此方剂由生地黄、生黄芪、山药、山萸肉、女贞子、云茯苓、泽泻、姜半夏、丹参、益母草、川芎、制大黄组成[5]。生药材由沈阳天之行医药有限公司提供，由本院中药制剂教研室在严格生药鉴定后，按国家标准的制剂工艺制成益肾活血汤。此汤剂的总浓度为2g/mL。
　　实验所用的试剂：链脲佐菌素（STZ）购自美国Sigma公司，GSH-Px、SOD、MDA、GSP、NAG测定试剂盒购于南京建成生物工程研究所。血糖、血肌酐、尿素氮、甘油三酯测定试剂盒购于北京北化康泰临床试剂有限公司。
　　实验所用的主要仪器：immage为美国Beckman公司产品，UV-2100-分光光度计为龙尼柯上海仪器有限公司产品。�
　　
　　2 方 法�
　　
　　2.1 动物模型的建立和分组 取50只大鼠，其中8只为正常对照组，不注射STZ。其余42只经腹腔注射STZ（注射前将STZ溶解在PH4.0，0.1mol/L枸橼酸-枸橼酸钠缓冲液中）50mg/Kg，48h后取尾血测血糖，血糖≥16.7mmol/L为糖尿病，其中有35只为糖尿病，余下7只血糖未达到16.7mmol/L，从实验中剔除。将实验动物分为4组：A组（正常对照组）8只；B组（低剂量组，按18g/Kg给予汤剂）12只；C组（高剂量组，按26g/Kg给予汤剂）12只；D组（糖尿病组，未给汤剂）11只。�
　　2.2 观察指标 分别于实验的第3周、6周称体重，用代谢笼分别准确收集各组大鼠24h尿。第3周时，由大鼠内眦静脉采血，第6周断头取血。分别测定尿中微量白蛋白（mAlb）含量和β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶（NAG）活力和血清中的血糖、血肌酐、尿素氮、甘油三酯、丙二醛（MDA）、糖化血清蛋白（GSP）的含量及超氧化物歧化酶（SOD）、谷光甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活力。�
　　2.3 统计学处理
　　实验数据以±s表示，用SPSS统计软件，组间数据用t检验分析。�
　　
　　3 结果与分析
　　
　　结果见表1～5。
　　由表1可见，糖尿病模型组mAlb含量在第3周时高于正常对照组,低剂量组和高剂量组mAlb含量低于糖尿病模型组，低剂量组和高剂量组之间差异无统计学意义，与正常对照组比较差异也无统计学意义。第6周，糖尿病模型组mAlb含量明显高于正常对照组，低剂量组和高剂量组mAlb含量明显低于糖尿病模型组，与正常对照组比较差异无统计学意义，低剂量和高剂量两组之间比较无统计学意义。
　　第3周，NAG活力各组之间差异无统计学意义。第6周，糖尿病模型组NAG活力明显高于正常对照组，低剂量组和高剂量组之间比较差异无统计学意义，与正常对照组比较差异无统计学意义。�
　　
　　由表2可见，第3周，糖尿病模型组和低剂量组的GLU高于正常对照组，第6周，糖尿病模型组、低剂量组、高剂量组GLU明显高于正常对照组。糖尿病模型组、低剂量组、高剂量组TG含量第3周明显高于正常对照组，且低剂量组、高剂量组TG含量明显低于糖尿病模型组，高剂量组又明显低于低剂量组。第6周，糖尿病模型组、高剂量组TG含量明显高于正常对照组。�
　　
　　表3显示：糖尿病模型组、低剂量组、高剂量组的SCr、BUN在第3周时与正常对照组比较无统计学意义。第6周，糖尿病模型组和高剂量组的SCr、BUN明显高于正常对照组，低剂量组的BUN明显低于糖尿病模型组。�
　　
　　由表4可见，糖尿病模型组、低剂量组、高剂量组GSP含量在第3周、第6周都明显高于正常对照组。第6周，低剂量组、高剂量组GSP含量明显低于糖尿病模型组。第3周，糖尿病模型组、低剂量组、高剂量组MDA含量高于正常对照组。第6周，糖尿病模型组和低剂量组MDA含量高于正常对照组，而高剂量组与正常对照组比较无统计学意义，且低剂量组MDA含量明显低于糖尿病模型组。�
　　表5显示：第3周，糖尿病模型组、低剂量组、高剂量组SOD活力明显低于正常对照组，且低剂量组明显低于高剂量组。第6周，糖尿病模型组SOD活力明显低于正常对照组，而低剂量组、高剂量组与正常对照组比较无统计学意义，低剂量组SOD活力明显高于糖尿病模型组。第3周，糖尿病模型组、高剂量组的GSH-Px活力明显低于正常对照组。第6周，糖尿病模型组GSH-Px活力明显低于正常对照组，而低剂量组和高剂量组与正常对照组比较无统计学意义，但高剂量组的GSH-Px活力明显高于糖尿病模型组。�
　　
　　4 讨论
　　
　　mAlb是反映肾小球损害的较敏感的指标，尿中无蛋白尿时，已经出现mAlb，是衡量早期DN危险程度的一种重要指标。NAG是一种重要的溶酶体酸性水解酶，是肾小管功能受损较敏感的指标[6]。由本实验可见：糖尿病大鼠发病第3周，血肌酐、尿素氮并无明显改变，说明肾功能完好，但此时尿微量白蛋白已增高，第6周增加的愈加明显。而NAG活力在第6周明显增高，说明糖尿病肾病首先是肾小球受损，逐渐发展为肾小管受损。
　　近年来的研究表明高脂血症可以导致胰岛素抵抗的发生,损害胰岛β细胞参与糖尿病的发生和发展[2-3],并且可以诱发肾脏损害,参与肾脏纤维化的形成[7]。本实验显示，糖尿病大鼠血清中甘油三酯含量明显增高，说明糖尿病大鼠体内存在脂代谢紊乱。
　　目前公认，活性氧对肾组织的损伤作用是肾组织病变的最终介质。Ha等发现活性氧作为信号分子，使高糖诱导的系膜细胞蛋白激酶C（PKC）激活，核转录因子（NF）-kB和AP-1增多，从而使转化生长因子β（TGF-β）和纤连蛋白表达水平上调[8]。蛋白非酶糖化即Maillard反应所形成的AGEs及氧化反应所形成的糖氧化产物Pentosidine和脂质过氧化物，HNE、MDA荧光产物在糖尿病肾病发生中起重要作用。早期糖化蛋白极易透过肾小球滤过屏障，被系膜细胞或上皮细胞大量吸收后，诱使细胞内发生氧化损伤，刺激系膜细胞表达基质蛋白，现认为，非酶糖化产物中除AGEs，早期Amadori产物也可能参与糖尿病肾病的发生[9]。本实验显示，糖尿病大鼠血清中糖化蛋白含量、丙二醛含量明显增高，而SOD、GSH-Px活力明显降低，说明糖尿病大鼠体内存在非酶糖化反应和氧化应激增强。
　　中医界认为DN病因病机是随病程的发展而不断演变，早期为脾肾两虚，精微不固，痰瘀互阻，治疗原则为补益脾肾，固精，化瘀活血。此益肾活血方剂中生地黄、山萸肉、山药益肾健脾；茯苓、泽泻、姜半夏健脾化湿祛痰；黄芪、女贞子益气养阴；丹参、益母草、川芎、大黄活血化瘀通络。此方剂肝肾脾并补，通过培补先天、益气养阴、活血化瘀、利水消肿达到有效防止糖尿病肾病的发展[5]。由本实验可见，此益肾活血汤能够降低糖尿病模型大鼠尿中mAlb含量，并且随着病情的发展这种作用愈加明显。但对NAG活力的影响不大。表明此方剂主要通过作用于肾小球抑制微量白蛋白的产生来发挥作用，而对肾小管的作用不明显。随着病程的进展，糖尿病大鼠尿微量白蛋白越来越高，此方剂不能阻止尿mAlb随病程进展而不断增高的趋势。
　　中药益肾活血汤通过改善脂代谢紊乱、抗非酶糖化和氧化应激来改善肾功能，从而延缓糖尿病肾病的发生，但无降低血糖的作用，并且低剂量和高剂量之间并无太大的差别。�
　　
　　参考文献�
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　　［5］ 刘其刚.中西医结合治疗糖尿病肾病的临床研究[J].上海中医药杂志，2005，39（2）：29-30.�
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