风湿Ⅱ号胶囊对佐剂性关节炎大鼠血清肿瘤坏死因子—α和白细胞介素的影响
时间：2021-04-23 08:02:00 来源：达达文档网 本文已影响 人 
摘要：目的 观察风湿Ⅱ号胶囊对佐剂性关节炎（AA）大鼠血清中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）与白细胞介素（IL）-4、IL-10的影响，并探讨其作用机制。方法 除空白组外，采用弗氏完全佐剂注射于大鼠右后足跖皮内制作AA大鼠模型，并随机分为模型组、阳性药（雷公藤多甙片）组及中药高、中、低剂量组。中药高、中、低剂量组分别以风湿Ⅱ号胶囊药液0.648、0.324、0.162 g/kg灌胃，阳性药组用雷公藤多甙片6.0 mg/kg灌胃，空白对照组及模型组给予等容积蒸馏水，每日1次。用药28 d后，观察治疗前后各组大鼠的一般情况、体质量变化、关节炎指数，并测定各组大鼠血清中TNF-α、IL-4、IL-10水平。结果 与空白组比较，模型组大鼠体质量增长缓慢，血清中TNF-α显著升高，而IL-4及IL-10则明显下降（P<0.01）；与模型组比较，中药各组及阳性药组大鼠的体质量增长快，关节炎指数明显降低，且均可降低TNF-α含量，升高IL-4、IL-10水平（P<0.05或P<0.01）；与阳性药组比较，中药高剂量组能显著增加AA大鼠的体质量（P<0.05），降低关节炎指数（P<0.01），降低血清中TNF-α水平（P<0.01），中药高、中剂量组则能显著升高IL-4、IL-10水平（P<0.01）。结论 风湿Ⅱ号胶囊通过降低血清中TNF-α含量，升高IL-4、IL-10水平，恢复类风湿性关节炎的细胞因子间的平衡，从而达到防治类风湿性关节炎的作用。
关键词：风湿Ⅱ号胶囊；佐剂性关节炎；肿瘤坏死因子-α、白细胞介素-4、白细胞介素-10；大鼠
DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2013.05.016
中图分类号：R285.5 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2013）05-0045-03
类风湿性关节炎（rheumatoid arthritis，RA）是以对称性多关节炎为主要临床表现，关节滑膜慢性炎症、关节的进行性破坏为特征的自身免疫性疾病。该病预后较差，晚期可引起关节强直、畸形，功能严重受损，同时可造成心、肺、肾等多脏器、多系统损害，严重危害患者的健康和生存质量。RA属中医学
基金项目：陕西省科学技术研究发展计划（2012K19-05-03）
“痹病”范畴。有学者认为该病病机为虚实寒热错杂，活动期多湿热，治疗当祛风清热、利湿活血通络，缓解期虚实互见、寒热错杂，应寒热并用、攻补兼施[1]。吉海旺教授结合自己多年的临床经验，从补肾活血入手，研制的风湿Ⅱ号胶囊作为本院内制剂在临床应用20多年，取得了良好的治疗效果[2-5]。本实验通过观察风湿Ⅱ号胶囊对佐剂性关节炎（adjuvant arthritis，AA）大鼠血清中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）与白细胞介素（IL）-4、IL-10的影响，探讨其作用机制。
1 实验材料
1.1 动物
清洁级SD大鼠48只（雄性），平均体质量（200±20）g，鼠龄8～10周，西安交通大学动物实验中心提供，动物许可证号：SCXK（陕）2012-001。普通大鼠饲料饲养。
1.2 药物与试剂
风湿Ⅱ号胶囊（0.4 g/粒）由淫羊藿、鹿角胶、巴戟天、补骨脂、骨碎补、何首乌、丹参、乳香、独活、乌梢蛇等组成，本院制剂室提供；雷公藤多甙片，黄石飞云制药有限公司，批号Z33020422；弗氏完全佐剂及TNF-α、IL-4、IL-10试剂盒均购于Sigma-Aldrich公司。
1.3 主要仪器
游标卡尺，瑞士TESA量具公司；精密天平，苏电测仪天平仪器厂生产，型号：GTZA；光栅分光光度计，苏州奇乐电子科技有限公司，型号：721；冷冻离心机，湘仪离心机仪器有限公司。
2 实验方法
2.1 造模
SD大鼠适应性饲养2周后，将弗氏完全佐剂于实验大鼠右后足跖皮内进行注射[0.1 mL/（次·只）]，造模第2日开始出现右后足跖肿胀，第8日再次注射，14 d后成功诱发AA大鼠模型。
2.2 分组与给药
48只SD大鼠随机分为空白组、模型组、阳性药组及中药高、中、低剂量组，每组8只。造模成功后开始给药，连续28 d，各组大鼠每只3 mL/d灌胃。中药高剂量组予0.648 g/kg风湿Ⅱ号胶囊药液灌胃（相当于成人每日每公斤体质量12倍），中药中剂量组予0.324 g/kg风湿Ⅱ号胶囊药液灌胃（相当于成人每日每公斤体质量6倍），中药低剂量组予0.162 g/kg风湿Ⅱ号胶囊药液灌胃（相当于成人每日每公斤体质量3倍），阳性药组予6.0 mg/kg雷公藤多甙片灌胃（相当于成人每日每公斤体质量6倍）；空白组及模型组给予等容积的蒸溜水灌胃。均每日1次。
2.3 观察指标
2.3.1 一般指标 造模及给药前后观察大鼠神态、毛色、饮食、活动情况、体质量、双侧足跖厚度及关节炎指数（arthritis index，AI）。AI严重程度评估[6]：0分为无红肿；1分为小趾关节红肿；2分为趾关节及足跖肿胀；3分为踝关节以下的足爪肿胀；4分为包括踝关节在内的全部足爪肿胀。大鼠四肢关节积分相加，即为AI。
2.3.2 生化指标及检测方法 用药28 d后，股动脉采血，放置于干燥管中，将干燥管置于3000 r/min离心8 min，取上清液分离血清，分别按试剂盒说明书方法测定血清TNF-α、IL-4、IL-10的含量。
3 统计学方法
采用SPSS15.0统计软件进行分析。计量资料以—x±s表示，组间比较采用t检验。P<0.05表示差异有统计学意义。
4 结果
4.1 一般情况
造模后第4日开始，造模SD大鼠出现精神倦怠，懒动，扎堆，食欲下降，跛行，右足肿胀明显。第9日后皮毛失去光泽，尾部相继出现炎性小结，鼻黏膜充血，懒动少行，精神萎靡，食欲明显下降，左足出现肿胀。从给药的第12日开始阳性药组和中药各组大鼠精神逐渐转好，食欲逐渐增加，其中中药高剂量组大鼠一般状况明显优于其他组，而模型组大鼠则无显著变化。实验中无大鼠死亡。
4.2 用药前后大鼠体质量变化情况（见表1）
4.3 用药前后大鼠关节炎指数变化情况（见表2）
4.4 风湿Ⅱ号胶囊对佐剂性关节炎大鼠肿瘤坏死因子-α、白细胞介素-4、白细胞介素-10影响（见表3）
5 讨论
RA的病因和发病机制至今尚未明确，目前认为其发病与多种因素有关，其中免疫因素被认为起着极为重要的作用，而细胞因子参与了复杂的免疫调节网络，其致炎过程极为复杂，是多基因协同作用的结果[7]。在RA相关的细胞因子中，TNF-α与IL则是RA发病机理中居中心地位的细胞因子[8]。TNF-α具有较强的生物活性，除诱导炎症反应外，还可杀伤靶细胞（病毒感染细胞）、肿瘤细胞，引起发热、代谢紊乱，导致恶液质，并与关节软骨破坏有关。TNF-α协同IL-1可激活血管内皮细胞核转录因子-κB，上调细胞间黏附分子-1等黏附分子活性，导致局部急性炎症的发生，通过诱导软骨细胞产生其他炎性细胞因子（如IL-6、IL-17、IL-18），导致炎症加重，并成为RA关节软骨破坏的主要因子。IL-4、IL-10被认为是抑炎性细胞因子，其中IL-4主要可促使巨噬细胞向炎症部位移动，抑制TNF-α、IL-1、IL-6等细胞因子的分泌及活性，并且能产生IL-1受体拮抗剂，具有明显对抗IL-1的作用，并可促进Th2细胞的增殖，从而抑制Th1介导免疫应答[9]。IL-10可以通过下调Th1介导的免疫应答反应和增加产生IL-10/TNF-β的调节性T淋巴细胞来发挥抑制炎症和骨与软骨破坏的作用，并能抑制TNF-α、IL-1的产生[10]。有实验表明，IL-4、IL-10有抑制降解软骨的蛋白酶的分泌及逆转某些分解因子的作用，二者的协同作用抑制了体内软骨的破坏[11]。在正常人体中，促炎性因子与抑炎性因子是相对平衡的，共同组成了一种细胞因子网络，一旦这一平衡被打破，则导致RA的发生。
吉海旺教授根据《素问·痹论》“骨痹不已，复感于邪，内舍于肾”之说，认为RA的发病与肾有着密切的关系。肾为先天之本，生命之根，藏真阴而寓真阳，为水火之脏，人之生身源于肾，生长发育基于肾，生命活动赖于肾，因此，人以五脏为中心，而肾为五脏之根本。肾精充则生命力、抵抗力及适应力强，邪不易侵而致病，类似于现代医学免疫系统的自稳与监视功能。“肾主骨”、“其充在骨”；肾藏精，精能生髓，髓以养骨，故骨的生长、发育、修复等均有赖于肾中精气的滋养。《素问·逆调论篇》曰：“肾者水也，而生于骨，肾不生则髓不能满，故寒甚至骨也……病名曰骨痹，是人当挛节也。”因此，补肾可以强藩篱、补骨髓、壮筋骨，使紊乱的免疫系统恢复平衡。现代药理学研究表明，不少补肾药具有调节细胞因子作用，如淫羊藿中所含的淫羊藿苷能明显抑制TNF-α mRNA的表达[12]，异戊二烯基黄酮醇也能使RAW264.7细胞中TNF-α水平降低、IL-10水平升高[13]；巴戟天多糖可能通过调节血清微量元素水平及IL-6、TNF-α表达水平，提高切除卵巢后骨质疏松大鼠骨密度[14]；还可通过降低TNF-α和IL-1表达水平来发挥对血清护骨素（osteoprotegerin，OPG）表达水平的调节作用，进而发挥对骨质疏松的保护作用[15]；骨碎补总黄酮能调节细胞因子IL-6、IL-4、TNF-α的水平，对血清TNF-α、IL-6水平有抑制作用，而对IL-4分泌有促进作用[16]。本研究表明，风湿Ⅱ号胶囊可以使AA大鼠恢复精力、增加体质量、减轻炎症反应，从而对RA具有良好的防治效果，其机制可能是通过下调大鼠血清中TNF-α的含量，上调IL-4、IL-10的水平，恢复细胞因子间平衡，从而发挥治疗RA的作用。 参考文献：
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（收稿日期：2012-10-16，编辑：华强）
