参知健脑胶囊对记忆障碍小鼠模型行为学的影响
时间：2021-04-23 08:03:13 来源：达达文档网 本文已影响 人 
[摘要] 目的 观察参知健脑胶囊对再现性、巩固性、获得性记忆障碍小鼠模型行为学的影响。 方法 均以跳台成绩为依据，将ICR小鼠随机为空白组、模型组、西药组、超大剂量组、大剂量组、中剂量组、小剂量组，每组18只。灌胃用药7 d后用30%乙醇、12.5 mg/mL亚硝酸钠、0.3 mg/mL东莨菪碱致再现性、巩固性、获得性记忆障碍小鼠模型造模，记录避暗被动躲避训练中各组动物的潜伏期、电击次数，并统计分析。 结果 在再现性记忆障碍模型中，与模型组比较，西药组（吡拉西坦）及大、中、小剂量组潜伏期、电击次数，差异均有高度统计学意义（P ＜ 0.01）；在巩固性记忆障碍模型中，与模型组比较，西药组（安理申）及中剂量组的潜伏期，差异均有统计学意义（P ＜ 0.05或P ＜ 0.01）；在获得性记忆障碍模型中，与模型组比较，大、中、小剂量组的潜伏期，差异均有统计学意义（P ＜ 0.05或P ＜ 0.01）。 结论 在行为学方面，参知健脑胶囊中剂量对再现性及巩固性记忆障碍模型均有较稳定的改善学习记忆成绩的作用。
[关键词] 参知健脑胶囊；记忆障碍；行为学；小鼠模型
[中图分类号] R285.5[文献标识码] A[文章编号] 1673-7210（2012）03（a）-0032-03
随着脑血管病发病率的逐年增高，血管性痴呆的患病率也相应提高，目前北京地区血管性痴呆的患病率达1.5%[1]。目前血管性痴呆的治疗手段有限，西药作用靶点单一，疗效难以满足患者的需求。发挥中医药多靶点优势，优化组方配伍，开发有效治疗血管性痴呆的现代中药是摆在中医药工作者面前的一项重要课题。参知健脑胶囊由人参、知母、赤芍等药物提取物按一定比例优化配伍而成[2]，具有扶正、通络、解毒的功效，是以王永炎院士等[3-5]提出的“正虚毒损络阻”血管性痴呆创新病因病机理论为基础研发而来。本研究旨在观察参知健脑胶囊对记忆障碍小鼠模型行为学的影响，为本药物的临床应用提供可靠的药效研究数据。
1 仪器与试药
1.1 药物及仪器
参知健脑胶囊（粉装），临床剂量为1.05 g/d，由北京中医药大学中药学院制备，批号：20100907；吡拉西坦片，天津金世制药有限公司，批号：20100715；多奈哌齐片，卫材（中国）药业有限公司，批号：091002A；95%乙醇，北京化工厂，批号：20030917；亚硝酸钠（分析纯），北京化工厂，批号：100201；氢溴酸东莨菪碱注射液（0.3 mg/支），徐州莱恩药业有限公司，批号：1010201；无菌生理盐水，北京双鹤药业股份有限公司，批号：A201010261。跳台仪及程控避暗箱（中国医学科学院药物研究所）。
1.2 实验动物
ICR小鼠雌雄各半，体重18～20 g，分为三批次（合格证号分别为：0199440、0194548、0202246），每批数目为雌雄各55、75、75只，均由北京维通利华实验动物技术有限公司提供。每日光照12 h，自由进食饮水。
2 方法与结果
2.1 动物模型制作及分组给药
2.1.1 再现性记忆障碍模型实验分组及给药对雌雄各55只小鼠进行跳台被动回避训练，根据学习成绩各筛选54只，随机将其分为6个组，分别为空白组、模型组、西药组（吡拉西坦），参知健脑胶囊大剂量组、中剂量组、小剂量组（大、中、小三个剂量比例为9∶3∶1，其中，中剂量为人临床剂量的折算剂量），每组18只。给药方式为灌胃，剂量为0.1 mL/10 g，空白组、模型组给予等体积生理盐水，西药组给予吡拉西坦，剂量为0.54 mg/kg。
2.1.2 再现性记忆障碍模型的制作及观察指标各组在测试前连续给药7 d，在末次给予生理盐水、吡拉西坦、参知健脑胶囊大、中、小剂量后2 h后进行避暗被动回避训练，训练时间为300 s。第8天，除空白组外，其他各组给药1 h后给予30%乙醇灌胃，雄鼠剂量为0.15 mL/10 g体重，雌鼠剂量为0.20 mL/10 g体重，空白组给予等体积生理盐水。30 min后进行避暗被动回避训练，记录潜伏期及遭受电击次数。
2.1.3 巩固性、获得性记忆障碍模型实验分组及给药对雌雄各75只小鼠进行跳台被动回避训练，根据学习成绩各筛选63只，随机将其分为7个组，分别为空白组、模型组、西药组（安理申）、参知健脑胶囊超大剂量组、大剂量组、中剂量组、小剂量组（超大、大、中、小三个剂量比例为18∶9∶3∶1，其中，中剂量为人临床剂量的折算剂量），每组18只。给药方式为灌胃，剂量为0.1 mL/10 g，空白组、模型组给予等体积生理盐水，西药组给予安理申，剂量为0.65 mg/kg。
2.1.4 巩固性记忆障碍模型的制作及观察指标各组在测试前连续给药7 d，在末次给予生理盐水、安理申、参知健脑胶囊超大、大、中、小剂量后2 h后，除空白组外，其他各组给予皮下注射亚硝酸钠溶液，剂量为125 mg/kg，之后立即进行避暗被动回避训练，训练时间为300 s。第8天，重复避暗被动回避训练，记录潜伏期及遭受电击次数。
2.1.5 获得性记忆障碍模型的制作及观察指标各组在测试前连续给药7 d，在末次给予生理盐水、安理申、参知健脑胶囊超大、大、中、小剂量后2 h后，除空白组外，其他各组给予皮下注射氢溴酸东莨菪碱注射液，剂量为4.5 mg/kg，之后立即进行避暗被动回避训练，训练时间为300 s。第8天，重复避暗被动回避训练，记录潜伏期及遭受电击次数。
2.1.6 统计学方法采用SPSS 17.0统计软件，计量资料数据以均数±标准差（x±s）表示。由于各组数据不符合正态性，采用多个独立样本的Kruskal-Wallis H非参数检验法，采用秩变换技术予以秩转换后，采用单因素方差分析（One-Way ANOVA）的LSD-t检验法进行组间两两比较[7]。以P < 0.05为差异具有统计学意义。
2.2 结果
2.2.1 再现性记忆障碍模型行为学实验结果该实验中共有7只动物因灌胃死亡。结果显示，与模型组比较，西药组（吡拉西坦）及大、中、小剂量组潜伏期、电击次数增大，差异均有高度统计学意义（P ＜ 0.01）；大、中、小剂量组与西药组比较，电击次数差异均有高度统计学意义（P ＜ 0.01）。见表1。
2.2.2 巩固性记忆障碍模型行为学实验结果该实验中共有9只动物因灌胃死亡。结果显示，与模型组比较，西药组（安理申）及中剂量组的潜伏期增大，差异均有统计学意义（P ＜ 0.05或P ＜ 0.01）；小剂量组与西药组比较，潜伏期差异有统计学意义（P ＜ 0.05）；其余各组间的潜伏期及电击次数差异均无统计学意义。见表2。
2.2.3 获得性记忆障碍模型行为学实验结果该实验中共有9只动物因灌胃死亡。结果显示，与模型组比较，大、中、小剂量组的潜伏期，差异均有统计学意义（P ＜ 0.05或P ＜ 0.01）；各剂量组潜伏期及电击次数与西药组比较，组间差异均无统计学意义。见表3。
3 讨论
人参、知母和赤芍是临床治疗VD的常用药物，三种成分均能改善痴呆动物模型学习记忆能力。人参为五加科草本植物人参的根，具有大补元气，补肺、脾、心、肾气，生津，安神益智的功效。研究发现，人参皂苷有提高拟痴呆模型动物学习记忆能力、改善脑内神经递质含量及作用、减少神经细胞凋亡、保护海马神经元和突触、增加血管新生、抗脑缺血、保护脑损伤等作用[8-16]，可以用来“扶正”。知母，苦、寒、无毒，为百合科植物知母的根茎，能清热降火，滋阴润燥。研究发现，知母皂苷元能改善痴呆动物的学习记忆能力，良性调节痴呆动物的胆碱能系统，清除自由基等[17-22]，可以用来“清热以祛毒”。赤芍，苦，微寒，归肝经，清热凉血，散瘀止痛。研究发现，芍药总苷能提高痴呆动物的学习记忆能力，对神经细胞缺氧、缺糖、氧自由基及一氧化氮神经毒性等损伤有显著保护作用[23-24]，可以用以“散瘀凉血，以通脑络”。因此，全方具有“扶正、祛毒、通络”的作用，以治疗VD，而其组分又均具有改善脑内神经递质含量及作用、保护神经元和突触、抗脑缺血、清除自由基等，从而提高学习记忆能力，改善痴呆的作用。
本研究选用跳台法进行随机分组以达到各实验组间基线的均衡，为保证所考察认识行为的前后一致性和实验结论的可靠性，选用避暗实验作为最终检测方法。跳台法及避暗法都属于被动回避的行为学实验方法，被广泛用于认知药物的评筛，有较高的敏感性[25-26]。
在再现性记忆障碍模型实验中，就潜伏期而言，与模型组比较，大、中、小剂量组差异有高度统计学意义（P ＜ 0.01），且三组数据依次递减，说明参知健脑胶囊改善再现性记忆障碍的疗效与剂量间存在一定正性的量效关系。在参知健脑胶囊对巩固性及获得性记忆障碍模型的影响实验结果中，中剂量组与模型组比较差异有统计学意义（P ＜ 0.05），说明这两个剂量的药效较为稳定。而超大、大、小剂量却未表现出明显的药效，说明参知健脑胶囊的剂量与改善上述两种记忆障碍模型的药效间无明显线性关系。获得性记忆障碍模型实验中，除对照组外，大、中、小组与模型组比较，虽差异有统计学意义，但是各组间均数差值较小，故其现实意义不大。
由于认知行为的多维性，不同的行为学实验方法仅能考察其某一方面，本研究仅从被动躲避一个方面考察记忆障碍小鼠模型的认知行为，不够全面，存在一定的局限性。另外，考察药物对实验动物行为学的影响仅是药效学研究中一个表观层面，故应再从认知行为的其他角度，以及生化、分子生物学等深层面进一步探讨参知健脑胶囊治疗记忆障碍的有效性及相关药效机制。
[参考文献]
[1]张振馨，魏镜，洪霞，等.北京城乡痴呆及其主要亚型的患病率[J].中华精神科杂志，2001，34（4）：199-203.
[2]杨傲然，田昕，钟华，等.参知健脑片有效组分的最佳配伍筛选[J].中华中医药学刊，2009，27（12）：2600-2602.
[3]王永炎.关于提高脑血管疾病疗效难点的思考[J].中国中西医结合杂志，1997，17（2）：195-196.
[4]唐启盛.“浊毒痹阻脑络”对老年期痴呆的影响[J].北京中医药大学学报，1997，20（6）：24-25.
[5]李澎涛，王永炎，黄启福.“毒损脑络”病机假说的形成及其理论与实践意义[J].北京中医药大学学报，2001，24（1）：1-6.
[6]谢颖桢，邹忆怀，张云岭.血管性痴呆病因病机探讨[J].北京中医药大学学报，2000，23（6）：1-3.
[7]刘万里，薛茜，曹明芹，等.用SPSS实现完全随机设计多组比较秩和检验的多重比较[J].地方病通报，2007，22（2）：27-29.
[8]马天才，于庆海.人参对学习记忆的药理影响[J].中草药，1990，21（7）：38-40.
[9]李君庆，李宗锴，段红.年龄及人参皂甙Rg-l对大鼠大脑皮层NO释放的影响[J].药学学报，1997，32（4）：251-254.
[10]薛雨芳.人参皂甙Rg-l对大鼠海马脑片长时程增强效应影响的实验研究[J].中医研究，1999，12（2）：10-13.
[11]张晓冬，李万亥.人参皂甙Rg-l、Re对β-淀粉样蛋白诱导原代培养海马及皮质神经元损伤的保护作用[J].第二军医大学学报，2000，21（10）：941-943.
[12]陈丽敏，陈晓春，林挺岩，等.人参皂甙Rg-l可能通过CDK4-pRB-E2Fl通路减少神经元凋亡[J].中国药理学通报，2002，18（6）：695-700.
[13]申丽红，张均田.人参皂甙Rg-l对脑缺血沙土鼠神经干细胞存活率和学习记忆能力的影响[J].中南药学，2004，2（1）：6-9.
[14]李爱红，柯开富，吴小梅，等.人参皂甙Rb-l，Rb-3，Rg-1对培养皮层神经细胞的抗缺血效应及其机制[J].中风与神经疾病杂志，2004，21（3）：231-234.
[15]李君庆，张香阁，张均田.人参皂甙Rg-1抗神经细胞凋亡作用机制的研究[J].药学学报，1997，32（6）：406-410.
[16]赵朝晖，陈晓春，朱元贵，等.人参皂甙Rg-l延缓细胞衰老过程中端粒长度和端粒酶活性的变化[J].中国药理学通报，2005，21（1）：61-66.
[17]胡雅儿，易宁育，何路明，等.知母对老年动物脑M受体数调整作用的机理[J].中药药理与临床，1994，10，（2）：10-13.
[18]范国煌，易宁育，夏宗勤.知母皂苷元对原代培养的神经细胞M受体密度和代谢动力学的影响[J].中国中医基础医学杂志，1997，6（3）：15-17.
[19]张永芳，胡雅儿，夏宗勤. 知母活性成分ZDY101调节M2受体mRNA稳定性的研究[J].上海第二医科大学学报，2005，25（4）：368-370.
[20]王顺官，徐江平.知母皂苷对衰老大鼠促智作用机制的研究[J].现代中西医结合杂志，2000，9（18）：1755-1756.
[21]陈勤，胡雅儿，夏宗勤.知母皂苷元对半乳糖拟痴呆模型小鼠学习记忆和脑内自由基代谢的影响[J].中药药理与临床，2000，16（5）：14-16.
[22]陈勤，夏宗勤，胡雅儿.知母皂苷元对拟痴呆大鼠β淀粉样肽沉积及胆碱能系统功能的影响[J].中国药理学通报，2002，18（4）：390-393.
[23]孙蓉，武栋栋，刘国卿.芍药苷对小鼠学习记忆能力的影响[J].中药药理学与临床，2006，22（1）：23-25.
[24]吴玉梅，许汉鹏，王春婷，等.芍药苷对体外培养大鼠星形胶质细胞活性的作用[J].解剖学报，2002，33（4）：430-435.
[25]张均田.神经药理学研究技术与方法[M].北京：人民卫生出版社，2005：299-300.
[26]吴俊芳.现代神经科学研究方法[M].北京：中国协和医科大学出版社，2006：705-707.
（收稿日期：2011-11-08本文编辑：卫 轲）
