溶出度三种测定方法 糖降肾康颗粒溶出度测定方法的研究
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[摘要] 目的：建立糖降肾康颗粒的溶出度测定方法。方法：采用桨法，以0.5%的十二烷基硫酸钠为溶出介质，转速50 r/min，采用HPLC法测定牛蒡苷的溶出量。结果：牛蒡苷在0.056 12 ~ 0.505 08 mg/ml浓度范围内线性关系良好，回归方程为：Y=2 690.2X-8.524 2（r=0.999 7）；平均回收率为100.44%（n=9）；样品溶出度均一性良好。结论：本方法简便、准确、重复性好，可用于该制剂的溶出度测定。
[关键词] 糖降肾康颗粒；溶出度；牛蒡苷；高效液相色谱法
[中图分类号] R917 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2011）07（a）-027-03
Study on dissolution test of Tangjiangshenkang Granules
ZHU Jie1, JIANG Qian2*, SU Qiguo2,LIU Ruibin2, LIU Junmin2
1.Jinhua Institute for Food and Drug Control, Jinhua 321000, China;2. Chongqing Kerui Pharmacy Co. Ltd., Chongqing 400060, China
[Abstract] Objective: To establish a method of the dissolution test for Tangjiangshenkang Granules. Methods: The paddle method was used with 0.5% sodium laurylsulfate as dissolution medium at a rotate speed of 50 r/min, and the content of Arctiin was determined by HPLC. Results: The linear range of Arctiin was 0.056 12 - 0.505 08 mg/ml, Y=2 690.2X-8.524 2（r=0.999 7）; the average recovery was 100.44% (n=9). Conclusion: The method is simple, accurate and reproducible for the dissolution determination of Arctiin in Tangjiangshenkang Granules.
[Key words] Tangjiangshenkang Granules; Dissolution; Arctiin; HPLC
糖降肾康颗粒是由单味药材牛蒡子，经现代工艺提取加工制成的中药制剂，目前为临床上唯一一个作用机制明确的，用于治疗糖尿病肾病的药物。牛蒡苷是该药物的主要活性成分，且为难溶性物质，其在体内的有效溶出是保证制剂疗效的关键之一。为此，本文通过对糖降肾康颗粒溶出测定方法的建立、研究，采用高效液相色谱法测定糖降肾康颗粒中牛蒡苷的体外溶出度，为评价和控制糖降肾康颗粒的质量提供了依据。
1 仪器与试药
Agilent1200系列高效液相色谱仪，VWD检测器，Agilent化学工作站；KQ5200B超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；BS124S电子天平（万分之一，Sartorius），XS105（十万分之一，Metter Toledo)；RCZ-8B溶出度试验仪，RZQ-8C溶出度自动取样器（天津市天大天发科技有限公司）。
糖降肾康颗粒1#，2#，3#（重庆科瑞制药有限责任公司生产）；牛蒡苷对照品（中国药品生物制品检定所提供，批号：110819-200505）；甲醇、乙腈为色谱纯，水为超纯水，盐酸、十二烷基硫酸钠（以下简称SDS）等为分析纯。
2 方法与结果
2.1 溶出度测定方法的建立
2.1.1 色谱条件 色谱柱采用Inertsil ODS-3(5 μm，4.6 mm×250 mm)；以乙腈-甲醇-水(2∶46∶52)为流动相；检测波长为280 nm；流速：1.0 ml/min；柱温：40℃；进样量：5 μl。在此色谱条件下测定对照品、糖降肾康颗粒样品及辅料样品，色谱图见图1，待测指标成分与其他成分分离度良好。
2.1.2线性关系 精密称取牛蒡苷对照品28.06 mg置50 ml容量瓶中，用甲醇溶解后定容，分别精密吸取1、3、5、7、9 ml至10 ml容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，制成0.056 12、0.168 36、0.280 60、0.392 84、0.505 08 mg/ml对照溶液。精密吸取对照溶液5 μl，注入液相色谱仪，测定，以峰面积积分值Y为纵坐标，牛蒡苷进样浓度X为横坐标绘制标准曲线，结果显示，牛蒡苷在0.056 12 ~ 0.505 08 mg/ml浓度范围内线性关系良好，回归方程为：Y=2 690.2X-8.524 2（r=0.999 7）。
2.1.3 重复性试验 精密称取1#样品0.11 g、0.15 g和0.22 g置具塞锥形瓶中，精密加入0.5%SDS 50 ml，相当于50%、70%、100%浓度的供试品溶液，各制备三份，溶解，滤过，进样5 μl，记录色谱图，结果显示，50%供试品溶液：牛蒡苷平均含量为90.01 mg/g，RSD为0.90%（n=3）；70%供试品溶液：牛蒡苷平均含量为90.33 mg/g，RSD为0.75%（n=3）；100%供试品溶液：牛蒡苷平均含量为89.98 mg/g，RSD为1.34%（n=3）；牛蒡苷平均含量为90.11 mg/g，RSD为0.91%（n=9），表明本试验测定方法的重复性良好。
2.1.4 回收率试验 精密称取1#样品0.055 g、0.077 g和0.110 g置具塞锥形瓶中，各三份，加入一定体积的对照品溶液（分别相当于牛蒡苷对照品5.050 8、6.702、10.053 mg），再加入0.5%SDS溶液补液到50 ml，溶解，滤过，进样5 μl，记录色谱图，结果见表1。结果显示，牛蒡苷平均回收率为100.44%，RSD为1.58%，表明本试验测定方法具有较好的准确度。 2.1.5 稳定性试验 精密吸取同一对照品溶液和供试品溶液按样品测定方法在0、1、2、4、8、12、24 h时间间隔内分别测定牛蒡苷的峰面积，记录色谱图，结果显示牛蒡苷对照溶液、牛蒡苷供试品溶液的RSD分别为1.05%、0.72%（n=7），表明牛蒡苷对照溶液和供试品溶液在24 h内基本稳定。
2.2 溶出试验条件的选择
2.2.1溶出度方法的选择 本品为颗粒剂，故选取《中国药典》2005年版二部XC 第二法（以下简称第二法）[1-2]；每袋含牛蒡苷在300~450 mg，在进行溶出测定时考虑到含量测定的线性范围及方法的简便，故选取900 ml作为溶出介质体积。
2.2.2 溶出介质的选择 根据溶出度指导原则[3]及相关文献[4-5]选取水、0.1 mol/L盐酸溶液、缓冲液（pH值6.8）、0.5% SDS溶液进行溶出介质选择，比较1#样品在各个溶出介质中的溶出度。结果表明，在4种溶出介质中，1#样品45 min时在上述各介质中的溶出量分别为84.03%、85.37%、86.22%、99.54%，均能达到80%以上，但在0.5%SDS溶液中牛蒡苷的溶出度最佳，故选取0.5%SDS溶液为溶出介质。
本文为全文原貌 未安装PDF浏览器用户请先下载安装 原版全文 2.2.3 转速的选择 取1#样品，以0.5%SDS 900 ml为溶出介质，转速分别为50、75、100 r/min，分别于5、10、15、20、30、45、60 min时取样5 ml并补液，滤过，精密吸取样品溶液5 μl，注入液相色谱仪，结果表明，样品在50 r/min的溶出良好，故确定转速为50 r/min。
2.2.4溶出度均一性试验 照溶出测定方法（第二法），每个溶出杯加入1#样品一袋，以0.5%SDS 900 ml为溶出介质，转速分别为50 r/min，依法操作，分别于5、10、15、20、30、45、60 min时取样5 ml并补液，滤过，精密吸取样品溶液5 μl，注入液相色谱仪，计算累积溶出量，并绘制其溶出曲线，重复测定三次，见图2。结果表明，样品溶出度的均一性良好。
2.2.5 样品溶出度的测定 取1#、2#、3#进行测定，照溶出测定方法（第二法），以0.5%SDS 900 ml为溶出介质，转速分别为50 r/min，依法操作，分别于5、10、15、20、30、45、60 min时取样5 ml并补液，滤过，精密吸取样品溶液5 μl，注入液相色谱仪，测定，计算累积溶出量，并绘制其溶出曲线，结果见表2。结果显示，该方法稳定，适用于糖降肾康颗粒的溶出度测定。
3 讨论
供试品的HPLC测定方法参照了《中国药典》2005年版中牛蒡子药材的含量测定方法[6]，结果发现，采用此方法测定供试品时，色谱峰型不佳，影响测定结果。因此，对流动相进行了选择，比较了甲醇-水、乙腈-水、乙腈-甲醇-水等多个系统，最终确定乙腈-甲醇-水(2∶46∶52)系统，该系统下的主峰保留时间较短，色谱峰型较佳，重复性好。
对于不溶于水或水溶性较低的制剂，推荐使用表面活性剂[3]，因此，我们选用了常用的表面活性剂SDS作为溶出介质，并对0.1%、0.2%、0.3%、0.4%及0.5%的SDS溶液进行了比较。试验显示，45 min时0.5%SDS溶液显示出更好的溶出效果。
通过对经0.45 μm的微孔滤膜过滤的供试品与采用离心处理的供试品的比较，确定滤膜对测定结果无影响；另取相应浓度的辅料溶液注入HPLC，色谱图显示辅料对测定结果无影响。
同批样品三次测定结果，以及三批样品测定结果显示，各个时间点的各溶出数据的RSD均小于10%，溶出结果变异性较小，故该方法能用于糖降肾康颗粒的溶出度测定，并为其质量控制了提供依据。
[参考文献]
[1] 国家药典委员会.中国药典[S]. 二部: 北京:化学工业出版社,2005:附录XC.
[2] 袁军,徐燕,王野,等. 司帕沙星颗粒剂溶出度的研究[J].华西药学杂志,2004,19(6):441-442.
[3] 美国FDA.口服固体制剂溶出度试验技术指导原则[S].1997.
[4] 马丽萍,徐朝晖,邱明丰.降糖益肾胶囊的溶出度研究[J]. 中国中药杂志,2007,32(9):754-756.
[5] 王亚敏.浅谈溶出度检查方法的研究[J].药物分析杂志,2007,27(10):1667-1670.
[6] 国家药典委员会.中国药典[S]. 一部: 北京:化学工业出版社,2005:48.
（收稿日期：2011-03-11）
[作者简介] 朱洁，女，29岁，浙江金华人，硕士研究生，主要从事药品检验及药物分析工作。
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