新生儿溶血病检测微柱法【微柱凝胶技术在新生儿溶血病检测中的应用】
时间：2019-01-13 04:36:13 来源：达达文档网 本文已影响 人 
[摘要] 目的 应用微柱凝胶检测技术探讨新生儿溶血筛查试验在诊断新生儿溶血病(HDN)中的临床应用。方法 采用微柱凝胶试验技术对疑为新生儿溶血病的157例黄疸患儿做直接抗人球蛋白试验、游离试验、放散试验。结果 在157例患者中证实由血型抗原不合引起的新生儿溶血病患者69例(43.9%),其中ABO-HDN64例(92.8%),Rh-HDN5例(7.2%)。在64例ABO-HDN的患儿中,A型29例,占45.3%,B型35例,占54.7%。ABO-HDN患儿A型与B型分布率经卡方检验,差异无统计学意义(χ2= 0.936,P>0.05)。出生天数≤3d的新生儿溶血病检出率65.2%(58/89),明显高于4～7d的新生儿溶血病检出率20.8%(11/53),>7d的15例未检出阳性标本。结论 微柱凝胶检测技术具有操作简便、敏感性高、准确等优点,值得推广。新生儿血标本早期检测可提高阳性检出率。
[关键词] 新生儿溶血病; 微柱凝胶检测技术
[中图分类号] R722.18 [文献标识码] A [文章编号] 1673-9701(2010)13-38-02
Application of Microcolumn Gel Immunoassay in Detection of Neonatal Hemolytic Disease
LU Lei LIU Yan
Linyi City Maternity and Child Health Hospital,Linyi 276001,China
[Abstract] ObjectiveTo explore the clinical application of microcolumn gel technique in the diagnosis of neonatal hemolytic disease(NHD). MethodsDirect antiglobulin test,antibody release test and free antibody test were performed in 157 cases suspected of NHD by using microcolumn gel assay. ResultsIn 157 case,69 cases of NHD(43.9%)caused by maternal-fetal blood type incompatibility were identified,in which 64 cases belonged to ABO-NHD(92.8%)and 5 case to Rh-NHD (7.2%). In thoseABO-NHD cases,29 cases(45.3%)were A blood type and 35 cases(54.7%) were B blood type. There was no significant difference in the distribution rates of A blood type and B blood type in ABO-NHD cases(χ2=0.936,P>0.05);And the NHD detection rate in newborns aged ≤3 days was higher than that in newborns aged 4 to 7 days(65.2% vs 20.8%),and the NHD detection rate was 0% in those aged >7days. ConclusionThe microcolumn Gel immunoassay is sensitive,simple and accurate. Earlier detection of peripheral blood samples from newborns conduces to the diagnosis of NHD.
[Key words]Neonatal hemolytic disease; Microcolumngel immunoassay technique
新生儿溶血病是由于母婴血型不合,胎儿红细胞进入母体循环致使母体产生了相应的IgG类抗体。该抗体作用于胎儿红细胞而引起的同种被动免疫性疾病。HDN可引起婴儿贫血、黄疸、水肿、肝脾肿大,严重者可导致胆红素脑病,引起新生儿死亡或智力发育障碍。因此,对HDN进行早期、准确的诊断有重要意义。由于微柱凝胶技术具有操作简单、结果准确、敏感且易于判读等优点,我们对我院2007年12月～2009年11月检测的157例标本进行分析,现将结果报道如下。
1 资料与方法
1.1 标本来源
本院2007年12月～2009年11月新生儿科病房高胆红素血症疑为HDN的患儿标本157例。
1.2 仪器与试剂
①仪器:BYL型血型血清学多用离心机与FYQ免疫微柱孵育器由长春博研科学仪器有限公司生产;②试剂:新生儿溶血病微柱凝胶检测卡和6%牛蛋白血清标准购于长春博迅生物技术有限公司,ABO红细胞购于上海血液生物医药有限公司。
1.3 方法
1.3.1 ABO、Rh血型鉴定及直接抗人球蛋白试验 将患儿待检红细胞用生理盐水配成1%的悬液,然后取50μL依次加入新生儿溶血病检测卡Ⅰ内用BYL型血型血清多用离心机离心5min(900rpm,2min;1500rpm,3min),取出判定结果。
1.3.2 游离试验 取新生儿溶血病检测卡Ⅱ,1、2、3孔各加入患儿血浆50μL,再分别加入50μL 1%的A、B、O标准红细胞悬液。
1.3.3 放散试验 ABO血型系统所致的HDN采用热放散法,Rh血型系统所致的HDN采用乙醚放散法,具体操作步骤见《全国临床检验操作规程》[1]。在新生儿溶血病检测卡Ⅱ的第4、5、6孔中各加入患儿放散液50μL,再分别加入50μL 1%的A、B、O标准红细胞悬液,37℃孵育15min,用BYL型血型血清多用离心机离心5min(900rpm,2min;1500rpm,3min)。
1.4 结果判读
红细胞留在微柱上端或分布在凝胶中为试验结果阳性;红细胞沉降至微柱底部为试验结果阴性。
2 结果
2.1 检测结果
通过对疑为新生儿溶血病的157例黄疸患儿检测确诊为HDN的69例,占送检标本的43.9%。ABO血型系统所致的HDN 64例,占92.8%(64/69),Rh-HDN 5例(7.2%)。在64例ABO-HDN的患儿中A型29例,占45.3%,B型35例,占54.7%;其血清学检测结果见表1。5例由Rh引起的HDN直接抗人球蛋白试验均为强阳性。
2.2 HDN检出率与新生儿出生天数的关系
见表2。
3 讨论
传统的试管法抗球蛋白检查方法在手工操作中受到血清与红细胞比例、离心速度和时间等因素的干扰,操作过程中需反复洗涤红细胞,结果判断人为影响因素较多,重复性较差;
而且在洗涤过程中由于抗原和抗体之间的亲和力较弱,抗体易被洗脱掉,易出现假阴性。微柱凝胶技术是建立在传统血型血清学基础上的一项免疫学检测技术,是通过调节凝胶的浓度来控制凝胶间隙的大小,利用离心力将抗原和抗体反应后的凝集红细胞留在微柱上端或分布在凝胶中,未凝集红细胞通过间隙到达微柱底部。同时不用洗涤红细胞可使抗人球蛋白被残留蛋白质中和,抗人球蛋白被洗涤后残留的盐分稀释所产生的假阴性不再发生[2]。因此,微柱凝胶法与传统试管法相比,具有操作简便、敏感、易于标准化、影响因素少、重复性好、结果可保存等优点,适用于大批量标本的检测。
我院临床送检的157例黄疸患儿检测确诊为HDN的69例,占送检标本的43.9%。ABO血型系统所致的HDN 64例,占92.8%(64/69),符合临床HDN以ABO-HDN为常见。母-婴血型O-A者,HDN的检出率46.8%(29/62),O-B者HDN的检出率38.9%(35/90),两者检出率经卡方检验无统计学意义。
直接抗人球蛋白试验在HDN诊断中有非常重用的作用,阳性提示患儿体内红细胞被抗体致敏,阳性程度提示发生溶血的程度。确诊为HDN的69例中Rh引起的5例直接抗人球蛋白试验为强阳性,而ABO引起的直接抗人球蛋白试验均为阴性,这是由于Rh引起的HDN较重,而ABO引起的较轻。红细胞上的抗体分子数目较少,不足以和抗人球蛋白产生可见反应,而有足够抗体分子的年轻红细胞大部分已被溶解[3]。64例ABO-HDN中,50例放散试验和游离阳性,10例仅放散试验阳性,4例仅游离试验阳性,仅游离试验阳性的患儿结合临床后诊断为HDN。理论上HDN放散试验都应该是阳性,考虑可能是在制备放散液时,离心的时间和温度没有控制好,放散出的抗体又重新吸附到红细胞表面,导致实验结果的假阴性。
HDN可引起新生儿黄疸、贫血、水肿、肝脾肿大,严重的出现胆红素脑病,使患儿神经细胞受到损害,导致生存质量严重下降。因此,采用敏感可靠的实验检测手段对HDN早期、准确的诊断有重要的意义。本组病例研究发现,出生天数≤3d的患儿HDN检出率为65.2%,出生天数37d的未检出HDN阳性。游离抗体只在出生后几天存在,之后会逐渐消失,致敏的红细胞也会在出生后逐渐破坏,使真正的HDN漏检。因此发现新生儿黄疸的患儿应尽早送检,提高HDN的检出率,并及时治疗。
[参考文献]
[1] 叶应妩,王毓三,申子瑜. 全国临床检验操作规程[M]. 第3版. 南京:东南大学出版社,2006:256.
[2] 武建. 微柱凝胶技术的临床应用及其实验研究现状[J]. 中国输血杂志,2003,16(5):369-371.
[3] 谢世荣,张兴明. 凝聚胺技术在产前血型抗体及新生儿溶血病检查中的应用[J]. 检验医学与临床,2008,5(4):218-219.
(收稿日期2010-03-10)
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