小儿清热利肺口服液中绿原酸最佳提取工艺及含量测定方法研究
时间：2021-04-23 07:58:22 来源：达达文档网 本文已影响 人 
作者简介：付瑶（1985-），女，助教，硕士 研究方向：主要从事中药药理学研究及药品质量分析研究工作 工作单位：东北师范大学人文学院
【摘要】目的：建立高效液相色谱法测定小儿清热利肺口服液中绿原酸含量的方法。方法：采用AgiLent C18（150mm×4.6mm，5μm）色谱柱，乙腈-0.2%磷酸溶液（12：88）为流动相，流速为1.0mL/min，检测波长为324nm，进样体积10μL。结果：绿原酸在0.081μg～0.73μg的范围内呈良好的相关性，相关系数为0.9998，平均回收率分别为98.96%、RSD为0.64%。结论：本方法操作准确、简便、快速，可有效用于小儿清热利肺口服液的质量控制。
【关键词】高效液相色谱法；小儿清热利肺口服液；绿原酸
Determ ination of chlorogenic acid in XiaoerQingreLifei oral solution by HPLC
YANG Bo，FU Yao，MA Li，ZHANG Wei-yu*
（College of Humanities $ Sciences of Northeast Normal University，Changchun 130117，China）
【Abstract】Objective：To establish a RP-HPLC method for the determination of chlorogenic acids in XiaoerQingre Lifei oral solution.Methods：The assay was performed on AgiLent C18 column with the mobile phase of acetonirile-0.2% phosphoric acid solution （10∶90） under a flow rate of1 mL？min-1.The detection wavelength was set at 324nm with injection volume of 10μL. .ResultsIt showed good linearity in the range of 0.081μg～0.73μg of chlorogenic acid （r=0.9998）.The average recovery was 98.96%（RSD=0.64% ）.Conclusion：The method is smiple， rapid， accurate and can be used for the determination of chlorogenic acids inXiaoerQingre Lifei oral solution.
【key words 】HPLC；Xiaoer Qingre Lifei oral solution；chlorogenic acid
【中图分类号】R722.12
【文献标识码】B
【文章编号】1004-4949（2014）12-0076-01
清热利肺口服液由银翘散和麻杏石甘汤个古方合方化裁而成，处方由银花、连翘、牛蒡子、麻黄等11味中药组成[1]，主治外感风热邪在肺卫风热咳嗽，广泛应用于发热、咳嗽或咯痰、流涕或鼻塞、咽痛、口渴、舌红或苔黄等证候的小儿急性支气管炎的治疗。其中金银花的主要有效成分为绿原酸，牛蒡子中含量也很高，它是一种具有广泛生理和药理活性的物质，具有抗菌、消炎、增加白细胞及兴奋中枢神经系统、清除自由基等多种药理作用[2-5]。小儿清热利肺口服液中麻黄具发表散寒、宣肺平喘、利水消肿等功效，盐酸麻黄碱为麻黄的有效成分，相关文献资料对该成分进行了研究，旨在以金银花为考核指标建立含量测定方法。为了提高小儿清热利肺口服液的质量可控性，建立高效液相色谱法测定制剂中绿原酸的含量测定方法，并进行了方法学研究，为了完善小儿清热利肺口服液的质量标准提供基础。
1 材料与方法
1.1 实验材料
1.1.1 仪器和设备 高效液相色谱仪：德国戴安（1）UItimate3000紫外检测器；美国安捷伦（2）1200紫外检测器；Meltter AE240双量程电子天平（梅特勒-托利多仪器有限公司），AB204-E电子天平（梅特勒-托利多仪器有限公司）；紫外分光光度计UV-2401（日本岛津）。
1.1.2 试剂与试药 绿原酸对照品（批号：110753-200413 规格：约20mg，供含量测定用），购自中国食品药品检定研究院；乙腈为色谱纯，磷酸为分析纯，水为重蒸水。
1.2 实验方法
1.2.1 系统适用性试验及色谱条件 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0.2%磷酸溶液（12：88）为流动相，流速为1.0mL/min，检测波长为324nm，进样体积10μL。理论板数按绿原酸峰计算应不低于2000。
1.2.2 对照品溶液的制备 称取绿原酸对照品约10mg，精密称定为10.12mg，置100ml棕色量瓶中，加50%甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取10ml，置25ml量瓶中，加50%甲醇稀释至刻度，摇匀，即得（每1ml含绿原酸40.48μg）。
1.2.3 供试品溶液的制备 精密吸取小儿清热利肺口服液1 mL置50ml棕色量瓶中，用50%甲醇稀释并定容至刻度，摇匀，滤过，即得。
2 实验结果
2.1 线性关系范围 精密吸取绿原酸对照品溶液2、5、8、12、15、18μl，按上述色谱条件分别注入液相色谱仪，测定峰面积，以进样量为横坐标（X），以峰面积为纵坐标（Y），绘制标准曲线方程为Y=25.369X +0.271（r=0.9998），表明绿原酸在0.081μg～0.73μg范围内呈良好线性关系。
2.2 专属性试验 取按处方比例缺金银花、牛蒡子的阴性对照样品，按含量测定项下方法测定HPLC色谱图，同法测定绿原酸对照品、供试品的HPLC色谱图。结果阴性对照样品的色谱图中，在与绿原酸吸收峰保留时间的相应位置上，无吸收峰出现，表明阴性对照无干扰，此方法专属性强。
2.3 稳定性试验 精密吸取同一批供试品溶液（批号20130101）1ml，按1.2.3项下制备供试品溶液，分别在0、2、4、8、12小时进样，记录峰面积，以供试品溶液中绿原酸的吸收峰面积的变化，考察其稳定性。结果显示样品溶液峰面积RSD为0.46%，表明样品在12小时内稳定性良好。
2.4 中间精密度试验 精密吸取同一批供试品溶液（批号20130101）1ml，按1.2.3项下制备供试品溶液，由不同人员、不同时间、使用不同高效液相色谱仪，按含量测定项下方法操作，测定绿原酸的含量。结绿原酸峰面积RSD为0.88%，表明此方法精密度良好。
2.5 重复性试验 精密吸取同一批供试品溶液（批号20130101），共6份，按1.2.3项下制备供试品溶液，进行含量测定。结果绿原酸峰面积RSD为0.69%，表明方法有良好的重现性。
2.6 回收率试验 精密吸取同一批已知含量的样品0.5ml（批号20130101，含量1.688mg/ml），共6份，精密加入绿原酸对照品溶液（浓度约为1.012mg/ml）8ml，按1.2.3项下制备供试品溶液，进行含量测定，计算6次平均回收率为98.96%、RSD为0.64%。表明此方法准确、可行。
2.7 样品含量测定 分别精密吸取3批小儿清热利肺口服液（批号分别为20130501、20130502、20130503）1mL，按1.2.3项下制备供试品溶液，分别精密吸取供试品溶液各10μL，注入液相色谱仪，测定峰面积，计算3批样品绿原酸含量分别为2.133、2.596、2.850mg/mL。
3 讨论
3.1 绿原酸为金银花的特征有效成分[6-7]。根据文献报道，本实验在去除金银花的阴性对照液中检测出较高含量的绿原酸，并通过实验证实牛蒡子中确实有较高的绿原酸存在。曾有关于在牛蒡子中检测出绿原酸的文献报道[8-9]，本研究进一步得到了证实，将其作为质量控制的又一指标奠定了一定的理论基础。
3.2 对绿原酸对照品溶液在200～400 nm处进行紫外光谱扫描检测，结果显示绿原酸在324 nm处有最大吸收，因此选择324 nm作为检测波长。
3.3 本研究建立的绿原酸含量测定方法简便、快速、分离度好、灵敏度高，可用于小儿清热利肺口服液的质量控制，进一步完善了复方金银花颗粒的质量标准[10]。
参考文献
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